(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210562520.6 (22)申请日 2022.05.23 (71)申请人 云南省农业科 学院花卉研究所 地址 650000 云南省昆明市盘龙区北京路 2238号云南省农业科学院科研 办公楼 4楼 (72)发明人 金春莲　李帆　耿怀婷　王继华　 孙丹　莫锡君　瞿素萍　 (74)专利代理 机构 北京知呱 呱知识产权代理有 限公司 1 1577 专利代理师 朱芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 香石竹半重瓣形成有关的AG基因突变位点 及应用 (57)摘要 本发明实施例公开了一种香石竹半重瓣形 成有关的AG基因突变位点及应用。 本发明提供一 种香石竹半重瓣形成有关的AG基因突变位点， 通 过直接测序结果是否有突变位点即可判断待测 香石竹品种是否为半重瓣， 可用于香石竹半重瓣 辅助选择育种。 权利要求书1页 说明书15页 序列表7页 附图3页 CN 114807424 A 2022.07.29 CN 114807424 A 1.一种香石竹半重瓣形成有关的AG基因突变位 点， 其特征在于， 所述突变位点为DcAGa基因的第185位C＞T位 点突变， 第218位C＞T位 点突变； 和/或， 所述突变位点为DcA Gb基因的第455位A＞T位点突变， 第581位T＞C位点突变， 第708位G ＞T位点突变。 2.一种检测权利要求1所述的香石竹半重瓣形成有关的AG基因突变位点的引物， 其特 征在于， 包括： 核苷酸序列如SEQ  ID No.1‑2的引物对； 和/或， 核苷酸序列如SEQ  ID No.3‑4的引物对。 3.权利要求2所述的引物在选 育香石竹半重瓣品种中的应用。 4.一种利用权利要求2所述的引物确定香石竹半重瓣品种的方法， 其特征在于， 包括如 下步骤： (1)获取待测香石竹的DNA， 得DNA模板； (2)利用所述引物对所述DNA为模板进行PCR扩增， 得PCR扩增产物； (3)对所述PCR扩增产物进行测序， 得测序基因序列； (4)当所述测序基因序列存在如权利 要求1中所述的AG基因突变位点时， 则确定待测香 石竹为半重瓣品种。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增程序为： 98℃预反应3min； 98 ℃反应30s， Tm值温度反应3 0s， 68℃反应1mi n， 共35个循环； 68℃反应5mi n。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增体系每10μL包括： 5μl  kod  mix； 10 μM前引物和后引物各0.3 μL； 0.4 μL基因 组DNA； 4 μl  ddH2O。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807424 A 2香石竹半重瓣形成有关的AG基因 突变位点 及应用 技术领域 [0001]本发明实施例涉及遗传育种技术领域， 具体涉及一种香石竹半重瓣形成有 关的AG 基因突变位 点及应用。 背景技术 [0002]香石竹(康乃馨)是世界花卉市场上重要的花卉作物之一。 在上个世纪， 重瓣的康 乃馨是育种的主要目标之一， 经过育种家 不断的努力， 培育出了许多康乃馨重瓣品种， 例如 “Master”，“Francesco ”和“Karen Rouge”。 这些品种在很长一段时间里， 受颇受人们的喜 爱。 然而， 随着社会的进步， 人们的审美习惯也在发生着改变， 尤其是年轻人。 因此， 康乃馨 半重瓣慢慢出现在人们的视野中。 很明显， 大众审美的改变给商业市场带了挑战， 但同时也 提供了机遇。 [0003]在过去的十年里， 花发育模型在模式植物拟南芥里进行了很深入的研究， 在部分 的观赏植物中也进行了研究。 一般来说， A ‑、 B‑和C‑类基因单独或共同调节 花器官发育。 A类 基因单独控制萼片的形成， A类基因与B类基因一起控制花瓣的形成； C类基因单独控制心 皮， B类基因与C类基因一起决定雄蕊的形成[2,3]。 在拟南芥中， C类基因AGAMOUS(AG)基因功 能丧失可促进  A类基因(APETALA1， AP 1； APETALA2， AP2)的过表达， 导致雄蕊同源异体转化 为花瓣。 反过来， AP2的过度积累可以降低AG的表达水平， 并导致雄蕊同源异体转化为花瓣。 同样， AG功能缺失导致日本晚樱,山茶,Tricyrtis macranthopsis和月季的花瓣数量增加。 而AP2基因miR172靶位点的突变导致AP2表达升高， 导致桃花、 玫瑰、 康乃馨、 牡丹、 山茶花形 成重瓣。 根据这些研究可以看出， 重瓣的形成基本上 受两种遗传 途径调节， 通过AG功能的丧 失或AP2的miR 172靶位点突变引起的。 [0004]在康乃馨中也研究了重瓣形成的分子机制， 并发现了AP2的miR172靶位点缺陷， 而 AG的调节途径仍然未知。 在这项研 究中， 我们从一个单瓣品种  (SF)和三个半重瓣(SDF)栽 培品种中克隆了两个AG直系同源基因(DcAGa和DcAGb)和DcAP2。 在SF和SDF栽培品种的 DcAGa和DcAGb中鉴定出序列多态性引起的氨基酸变化， 而在DcAP2的结合位点没有检测到 差异。 进一步的表达分析表明这些突变导致AGa和AGb的下调。 我们的研究结果表明， DcAG基 因与其他已经报道的观赏 植物的半重瓣形成相关。 发明内容 [0005]为此， 本发明实施例提供一种香石竹半重瓣形成有关的AG基因突变位 点及应用。 [0006]为了实现上述目的， 本发明实施例提供如下技 术方案： [0007]根据本发明实施例的第一方面， 本发明提供一种香石竹半重瓣形成有关的  AG基 因突变位点， 所述突变位点为DcAGa基因的第185位C＞T位点突变， 第218位C＞T位点突变； 和/或， [0008]所述突变位点为DcAGb基因的第455位A＞T位点突变， 第581位T＞C  位点突变， 第 708位G＞T位 点突变。说　明　书 1/15 页 3 CN 114807424 A 3