(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210471373.1 (22)申请日 2022.04.28 (71)申请人 北京大学第三医院 （北京大 学第三 临床医学院） 地址 100191 北京市海淀区花园北路49号 北京大学第三医院 (72)发明人 郭红燕　王同霞　高妍　谭焕然　 曾琳　王翕　田濬睿　李圆　 尚春亮　 (74)专利代理 机构 北京中和立达知识产权代理 有限公司 1 1756 专利代理师 张可 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于上皮性卵巢癌诊断的标志 物及其应用 (57)摘要 本发明涉及用 于上皮性卵巢癌诊断的标志 物及其应用， 所述标志物包 括外周血中的EpCA M、 MUC1和WT1的组合。 本发明通过检测EpCAM、 MUC1 和WT1在外周血中的表达进行CTC检测， 并进 一步 利用这三种标记物建立CTC的优化检测模型。 与 单一标记基因相比， 优化后的检测模 型具有更高 的敏感性和特异性， 对早期卵巢癌的诊断价值优 于CA125。 然而， 在预测耐药性和预后方面， 以单 一标记物阳性表达为特征的CTC似乎比优化的检 测模型更有优势。 CTCEpCAM+和CTCMUC1+的检出对化 疗耐药具有预测价值， CTC  MUC1+的检出可能提示 预后不良。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图4页 CN 115058516 A 2022.09.16 CN 115058516 A 1.用于上皮性卵巢癌诊断的标志物， 所述标志物包括外周血中的EpCAM、 MUC1和WT1的 组合。 2.根据权利 要求1所述的标志物， 所述标志物不包括HER2、 P16和 PAX8中的至少一个、 两 个或者全部 。 3.用于上皮性卵巢癌诊断的试剂盒， 所述试剂 盒包括用于定量检测外周血中的EpCAM、 MUC1和WT1的试剂。 4.权利要求3所述的试剂盒在制备诊断上皮性卵巢癌的试剂中的应用。 5.根据权利要求 4所述的应用， 所述试剂用于区分上皮性卵巢癌和卵巢良性肿瘤。 6.根据权利要求4所述的应用， 所述试剂用于上皮性卵巢癌患者对于化疗的耐药性预 测,所述试剂包括定量检测EpCAM和MUC1的PCR产物浓度的试剂盒。 7.根据权利要求6所述的应用， 所述试剂用于上皮性卵 巢癌患者预后不良的预测， 所述 试剂包括定量检测MUC1的PCR产物浓度的试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058516 A 2用于上皮性卵巢癌诊断的标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及 一种用于上皮性卵巢癌诊断的标志物及 其应。 背景技术 [0002]卵巢上皮性癌(EOC)是妇科致死率最高的恶性肿瘤， 5年生存率低于35％。 糖类抗 原 125(CA125)是临床诊断EOC最常用的血清学标志物， 但其早期诊断率只有50％， 且特异 性 差， 在炎症及子宫内膜异位症等良性疾病中也可有升高。 因此， 亟需要探索新的能改善 卵巢 癌早期诊断的检测方法。 [0003]中国专利申请CN111575385A通过实验首次发现了卵巢上皮性癌的一种诊断标志 物C3及 其受体C3AR， 实验结果表 明卵巢上皮性癌肿瘤组织中C3、 C3AR表达明显增加， 卵巢 上皮性 癌的表达量与卵巢上皮性癌组织中MDSC的浸润成正相关， 且还发现了卵巢上皮性 癌组织中  C3、 C3AR的表达量与MDSC相关的免疫抑制基因S100A8、 S100A9、 IL ‑10、 TGF‑β 的表 达成 正相关。 C3a受体拮抗剂SB290157可用于有效的治疗卵巢上皮性癌疾病， 为该类患者 带来 了新的治疗方法， 可有效减轻 该类患者的痛苦， 实用性强， 应用前 景广。 [0004]在本申请发明人之前的研究中， 探讨了这些6个标记物(EpCAM、 HER2、 MUC1、 WT1、 P16 和PAX8)在卵巢癌CTCs中的诊断价值， 但既往的研究只招募了健康女性作为对照， 缺乏 实 际临床工作中最需要 区分的卵巢良性肿 瘤。 通过对EOC患者外周血中的CTCs进行检测， 以 6个标记物(EpCAM、 HER2、 MUC1、 WT1、 P16和PAX8)中任一标志物的产物浓度大于等于 0.3ng/ μl界定为CTCs阳性， 基于上述检测方法在 109例初诊EOC患者中获得CTCs的检出率 为90％ (98/109)， 由此证实该检测方法的可行性。 然而， 该研究仅将健康女性纳入对照组， 这不 可避免地成为一个限制因素， 由于良性卵巢肿瘤是临床诊疗中最需与卵巢癌区分鉴 别的。 即， 上述研究结果难以为卵巢上皮性癌的诊断提供依据。 [0005]已有研究证实， EpCAM、 MUC1及WT1在卵巢癌中呈显著高表达。 其中EpCAM (Epithelial cell  adhesion molecule)上皮细胞粘附分子， 是一种上皮细胞定位的I型跨 膜糖蛋白， 是  卵巢癌中高表达的肿瘤相关抗原， 也是卵巢癌CTC检测技术应用最广泛的标 志物。 Zhao  L (52)等利用GEO(Gene  Expression  Omnibus)数据库分析了卵巢癌中的差异 表达基因， 结  果发现EpCAM在卵巢癌和正常组织中的表达有明显差异(p＝0.0048)， 尤其在 复发、 转移侵  袭力强和化疗耐药的卵巢癌中高表达， 由此提示， EpCAM在卵巢癌发生及转移 过程中发挥一  定作用。 MUC1(Mucin  1)基因编码一种膜结合的O ‑糖基化蛋白， 在上皮表面 形成保护性粘  膜屏障中起重要作用， 在近90 ‑100％的浆液性癌中过度 表达。 并且在 小鼠模 型中验证了MUC1  的表达是卵巢癌发生所必需的。 Hou  R等的研究进一步证实了在 恶性卵巢 上皮性癌组织中  MUC1的表达水平明显高于交界性、 良性和正常卵巢组织(P＜0.05)。 WT1 (Wilms tumor gene) 即肾母细胞瘤基因， 位于细胞核内， 编码肿瘤相关抗原。 WT1在大部分 卵巢癌中均表达， WT1  高表达的卵巢癌侵 袭性更强， 是提 示预后不良的因子 。 [0006]基于CTC检测的单一指标， 实验结果表明， 单个基因标记的特异性较高高(92.1％ ‑  说　明　书 1/9 页 3 CN 115058516 A 3