(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210437713.9 (22)申请日 2022.04.25 (71)申请人 中南大学湘雅二医院 地址 410011 湖南省长 沙市芙蓉区人民中 路139号 (72)发明人 黎志宏　杨眉　刘忠越　王嘉杰　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 专利代理师 袁靖 (51)Int.Cl. C12N 15/12(2006.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测MYOD1基因表达量的试剂在制备骨肉瘤 转化横纹肌肉瘤或骨肉瘤预后制剂中的应用 (57)摘要 本发明公开了检测MYOD1基因表达量的试剂 在制备骨肉瘤转化横纹肌肉瘤或骨肉瘤预后制 剂中的应用。 可以检测MYOD1基因在骨肉瘤患者 中的表达 水平， 为骨肉瘤患者转化横纹肌肉瘤以 及骨肉瘤预后预测提供了强有力的分子生物学 基础， 具有深远的临床意 义和推广性。 权利要求书1页 说明书6页 序列表3页 附图2页 CN 114686486 A 2022.07.01 CN 114686486 A 1.检测MYOD1基因表达量的试剂在制备骨肉瘤预后制剂中的应用， 所述的MYOD1基因 CDS序列见SEQ  ID NO.1。 2.根据权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 检测MYOD1基因表达量的试剂包括PCR检测 试剂。 3.根据权利 要求2所述的应用， 其特征在于， 所述PCR检测试剂包括MYOD1基因实时荧光 定量PCR特异性引物： 正向引物： 5 ‘‑CGCCATCCGCTATATCGAGG ‑3’； 反向引物： 5 ’‑ CTGTAGTC CATCATGC CGTCG‑3’。 4.根据权利 要求3所述的应用， 其特征在于， 所述PCR检测试剂还包括GAPDH内参实时荧 光定量PCR特异性引物： 正向引物:5 ’ ‑ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG ‑3’； 反向引物： 5 ’ ‑ GCCATCACGC CACAGTTTC‑3’。 5.检测MYOD1基因表达量的试剂在制备检测骨肉瘤转化横纹肌肉瘤制剂中的应用， 所 述的MYOD1基因CD S序列见SEQ  ID NO.1。 6.根据权利 要求5所述的应用， 其特征在于， 检测MYOD1基因表达量的试剂包括PCR检测 试剂。 7.根据权利 要求6所述的应用， 其特征在于， 所述PCR检测试剂包括MYOD1基因实时荧光 定量PCR特异性引物： 正向引物： 5 ‘‑CGCCATCCGCTATATCGAGG ‑3’； 反向引物： 5 ’‑ CTGTAGTC CATCATGC CGTCG‑3’。 8.根据权利 要求7所述的应用， 其特征在于， 所述PCR检测试剂还包括GAPDH内参实时荧 光定量PCR特异性引物： 正向引物:5 ’ ‑ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG ‑3’； 反向引物： 5 ’ ‑ GCCATCACGC CACAGTTTC‑3’。 9.过表达 MYOD1基因的试剂在制备骨肉瘤 细胞诱导分化为肌纤维制剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114686486 A 2检测MYOD1基因表达量的试剂在制备骨肉瘤转化横纹肌肉瘤 或骨肉瘤预后制剂中的应用 技术领域： [0001]本发明属于肿瘤分子生物学领域， 具体涉及检测MYOD1基因表达量的试剂在制备 骨肉瘤转 化横纹肌肉瘤或骨肉瘤预后制剂中的应用。 背景技术： [0002]骨肉瘤是发病率最高的原发性骨肿瘤， 具有少有的双高发病年龄段， 青少年或儿 童时期和老年期， 约为小儿肿瘤的5％， 是 儿童和青少年恶性肿瘤死亡率很高的疾病。 目前， 针对骨肉瘤的诊治手段依然十分保守。 自上世纪八十年代化疗被广泛应用以来， 近几十年 来， 骨肉瘤的预后和临床策略几乎没有改变， 手术切除结合传统化疗依然是治疗的主要手 段， 无转移患者的长期生存率约为70％， 而转移患者的生存率只有约20 ‑30％。 目前， 对骨肉 瘤患者的预后判定没有参考标准， 也没有特异性的指标， 远远不能适应临床对骨肉瘤患者 进行预后判定的需求。 因此， 对骨肉瘤患者的预后进行判定， 以便制 定更佳的治疗方案， 显 著提高患者 生存率， 成为骨肿瘤领域亟 待解决的重要课题。 [0003]此外， 我们通过高通量测序偶然间发现在部分骨肉瘤患者中存在横纹肌肉瘤 转化 的现象。 在随后的扩大标本量检测 中， 我们发现存在MYOD1表达的骨肉瘤患者具有相当比 例， 且预后不好。 在随后的实验验证中我们发现在骨肉瘤细胞中单独过表达MYOD1基因就能 够让骨肉瘤细胞诱导分化为肌纤维， 发生横纹肌肉瘤转化。 因此， MYOD1基因可以作为骨肉 瘤中是否出现横纹肌肉瘤转化的特异性检测分子， 为骨肉瘤病人的预后和将来的个性化治 疗提供检测靶点。 发明内容： [0004]本发明的目的是旨在克服现有技术的不足， 提供检测MYOD1基因表达量的试剂在 制备骨肉瘤转化横纹肌肉瘤以及骨肉瘤预后检测制剂中的应用， 所述的MY OD1基因CDS序列 见SEQ ID NO.1。 MYOD1基因gDNA序列见SEQ  ID NO.2。 [0005]所述的应用， 检测M YOD1基因表达量的试剂包括PCR检测试剂。 [0006]所述的应用， 所述PC R检测试剂包括MYOD1基因实 时荧光定量PC R特异性引物： 正向 引物： 5‘‑CGCCATCCGCTATATCGAGG ‑3’， 见SEQ ID NO .3； 反向引物：  5’‑ CTGTAGTC CATCATGC CGTCG‑3’， 见SEQ ID NO.4。 [0007]所述的应用， 所述PC R检测试剂还包括GAPDH内参实 时荧光定量PC R特异性引物： 正 向引物:5 ’‑ACAACTTTGGTATCGTGGAAGG ‑3’， 见SEQ ID NO .5； 反向引物：  5’‑ GCCATCACGC CACAGTTTC‑3’， 见SEQ ID NO.6。 [0008]本发明还提供了检测MYOD1基因表达量的试剂在制备检测骨肉瘤患者转化横纹肌 肉瘤的制剂中的应用， 所述的M YOD1基因CD S序列见SEQ  ID NO.1。 [0009]本发明还提供了过表达MYOD1基因的试剂在制备骨肉瘤细胞诱导分化为肌纤维制 剂中的应用。说　明　书 1/6 页 3 CN 114686486 A 3