(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210435567.6 (22)申请日 2022.04.24 (71)申请人 南京农业大 学 地址 210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号 (72)发明人 上官凌飞　王令宇　房经贵　王晨　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 吴爽　徐冬涛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01C 21/00(2006.01) A01G 17/02(2006.01) (54)发明名称 一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的 引物组及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于葡萄膨果肥最佳施 用时期判断的引物组及其应用， 所述引物组包括 如下四对引 物： (1)检测 VvPHO 1基因的引物对， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1~2所示； (2)检测 VvPHT 1‑4基因的引物对： 其核苷酸序列如SEQ   ID NO： 3~4所示； (3)检测 VvSORK基因的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5~6所示； (4)检测 VvKUP2基因的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 7~8所示； (5)检测基因 VvPHT 2‑1的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 9~10所示。 本发明以 葡萄叶面喷施KH2PO4实验为基础， 快速、 精确地 筛选能够预测葡萄膨果肥最佳施用时期的标记 基因， 具有快速简便、 特异性强、 精准可靠的等优 点。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 114854892 A 2022.08.05 CN 114854892 A 1.一种用于葡萄膨 果肥最佳施用时期判断的引物组， 其特 征在于， 包括如下四对引物： (1) 检测基因 VvPHO 1的引物对， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1~2所示； (2) 检测基因 VvPHT 1‑4的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3~4所示； (3) 检测基因 VvSORK的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5~6所示； (4) 检测基因 VvKUP2的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7~8所示； (5) 检测基因 VvPHT 2‑1的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 9~10所示。 2.一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的检测试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1 所述的引物组。 3.权利要求1所述的引物组、 权利要求2所述的试剂 盒在葡萄膨果肥最佳施用时期判断 中的应用。 4.一种用于葡萄膨 果肥最佳施用时期判断的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1) 取葡萄叶片， 提取RNA， 并反转录为cDNA， 以SEQ  ID NO： 1~2、 SEQ ID NO： 3~4、 SEQ  ID NO： 5~6、 SEQ ID NO： 7~8、 SEQ ID NO： 9~10为引物， 荧光定量PCR扩增 VvPHO 1基因、VvPHT  1‑4基因、VvSORK基因；VvKUP2基因； (2) 若VvSORK和VvKUP2基因的表达趋势由上升转为下降， 和/或 VvPHO 1和VvPHT 1‑4 基因的表达趋势由下降转为上升， 和/或 VvPHO 1/VvPHT 2‑1的比值为3～4， 和/或V vPHT 1‑ 4/VvPHT 2‑1的比值为27～35， 叶面喷施磷钾肥。 5.根据权利要求4所述的一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的方法， 其特征在于， 所述步骤 （2） 中， 若 VvSORK和VvKUP2基因的表达趋势由上升转为下降， VvPHO 1和VvPHT 1‑4 基因的表达趋势由下降转为上升， 且 VvPHO 1/VvPHT 2‑1的比值为3～4， V vPHT 1‑4/VvPHT  2‑1的比值为27～35， 叶面喷施磷钾肥。 6.根据权利要求4或5所述的一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的方法， 其特征在 于， 所述磷钾肥为KH2PO4。 7.根据权利要求4所述的一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的方法， 其特征在于， 所述方法适用于葡萄成年 树。 8.根据权利要求7所述的一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的方法， 其特征在于， 所述方法适用于 ‘巨峰’、‘阳光玫瑰’品种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854892 A 2一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的引物组及其应用 技术领域 [0001]本发明属于植物生物技术领域， 具体涉及用于一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期 判断的引物组及其应用。 背景技术 [0002]据 《中国农业统计年鉴》 统计， 截至2019年， 我国葡萄种植面积已达726.20hm2， 位 居柑橘、 苹 果、 梨之后的第四位。 葡萄 是需要大量肥料的果树， 化肥使用不当不仅浪费肥料， 还会造成环境污染。 精准施肥不仅可以节约肥料， 平衡土壤中的养分， 还可以减少环境污 染， 提高葡萄产量。 [0003]叶肥具有操作方便、 用量少、 肥 效快、 利用率高、 环境污 染小等优点。 在叶面施肥过 程中， 可以结合施药， 在一定程度上减少劳动力投入。 磷和钾是植物生长的重要组成部分， 在植物生长发育过程中发挥着非常重要的作用， 尤其是在柚子的发育过程中。 因此， 葡萄喷 施磷酸二氢钾可以促进果实膨大， 但在生产过程中不能准确掌握 喷施时期， 造成浪费肥料 等问题。 因此， 葡萄的精准施肥对于产业精细化和高质量发展尤为重要。 [0004]基因表达快于生物性状的变化， 利用遗传信息开发的生物标志物广泛应用于动物 (裸鲤等)、 植物(水稻、 菠菜、 亚麻等)和人类(遗传疾病)。 近年来， 相关研 究报告指出， 基于 基因表达信息变化开发的生物标志物可用于指导葡萄生产， 例如， 王剑等利用葡萄中氮代 谢基因的表达评估各种氮肥的效果。 张成等利用钾吸收相关基因评价葡萄叶面肥的效果和 浓度， Wang等利用葡萄花 果相关基因的表达情况来指导施肥。 发明内容 [0005]针对现有技术的不足， 本发明的第一个目的是提供一种判断葡萄膨果肥最佳喷施 时期的引物组， 建立分子方法预测葡萄膨 果肥喷施时期； [0006]本发明第二个问题是提供 上述引物组在判断葡萄膨 果肥最佳喷施时期的应用。 [0007]为解决上述 技术问题， 本发明采用如下技 术方案： [0008]一种用于葡萄膨 果肥最佳施用时期判断的引物组， 包括如下四对引物： [0009](1)检测基因VvPHO  1的引物对， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1～2所示； [0010](2)检测基因VvPHT  1‑4的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3～4所示； [0011](3)检测基因VvSORK的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5～6所示； [0012](4)检测基因VvKUP2的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7～8所示。 [0013](5)检测基因VvPHT  2‑1的引物对： 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 9～10所示。 [0014]本发明还保护一种用于葡萄膨果肥最佳施用时期判断的检测试剂盒， 包括前文所 述的引物组。 [0015]本发明还保护一种用于葡萄膨 果肥最佳施用时期判断的方法， 包括如下步骤： [0016](1)取葡萄叶片， 提取RNA， 并反转录为cDNA， 以S EQ ID NO： 1～2、 S EQ ID NO： 3～4、 SEQ ID NO： 5～6、 SEQ  ID NO： 7～8、 SEQ  ID NO： 9～10为引物， 荧光定量PCR扩增VvPHO  1基说　明　书 1/5 页 3 CN 114854892 A 3