(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221081826 3.8 (22)申请日 2022.04.22 (71)申请人 江苏先声医学诊断有限公司 地址 210023 江苏省南京市玄武区玄武大 道699-18号28幢 申请人 南京先声医学检验实验室有限公司 　 北京先声医学检验实验室有限公司 (72)发明人 顾菊　李振中　周水莲　潘吾思　 程彪　戴岩　李诗濛　任用　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种适于ONT测序平台的、 用于感染样本中 疱疹病毒检测的引物组及应用 (57)摘要 本申请涉及生物信息学技术领域， 具体提供 一种适于ONT测序平台的、 用于感染样本中疱疹 病毒检测的靶向富集引物组及其应用。 本申请根 据CMV， EBV， HSV1、 HSV2、 VZV人源疱疹病毒的基因 组序列， 基于生信算法设计引物和靶向区段， 本 发明引物兼备种属间特异性和种属内兼容性， 能 快速、 高效、 全面的从呼吸道感染体征和症状的 患者中识别并鉴别各类疱疹病毒， 具有高上靶 率、 灵敏度和准确性。 权利要求书2页 说明书12页 序列表3页 附图5页 CN 115044712 A 2022.09.13 CN 115044712 A 1.一种适于ONT测序平台的、 用于感染样本中疱疹病毒检测的引物组合， 其特征在于， 所述引物组合包括如下引物： (1)EBV引物: 正向引物： C CGTGAGATG GATCAGGCTC(SEQ  ID NO.1) 反向引物： CAGCA ACAACCTGTGCAGAC(SEQ  ID NO.2) (2)CMV引物: 正向引物： C CTCCACCCACTACAACACAC(SEQ  ID NO.3) 反向引物： GTGATGTC CCTCGCAGA ACCT(SEQ ID NO.4) (3)HSV1、 HSV 2、 VZV引物: 正向引物： G GTTGGAATTGRTTRCGAAAGTT(SEQ ID NO.5) 反向引物： CTC CCCSCYGACATTACGTWCACG(SEQ  ID NO.6) 其中引物中R,S,Y,W为简并碱基， 遵从简并碱基密码表： R(A/G),S(G/C),Y(C/T),W(A/ T)。 2.权利要求1所述的引物组合， 其特征在于， 所述(3)HSV1、 HSV2、 VZV引物的序列具体如 下： 正向引物F.1 GGTTGGAATTGATTACGAAAGTT(SEQ ID NO.7)； 正向引物F.2 GGTTGGAATTGGTTACGAAAGTT(SEQ ID NO.8)； 正向引物F.3 GGTTGGAATTGATTGCGAAAGTT(SEQ ID NO.9)； 正向引物F.4 GGTTGGAATTGGTTGCGAAAGTT(SEQ ID NO.10)； 反向引物R.1 CTCCCCGCCGACATTACGTACACG(SEQ  ID NO.11)； 反向引物R.2 CTCCCCCCCGACATTACGTACACG(SEQ  ID NO.12)； 反向引物R.3 CTCCCCGCTGACAT TACGTACACG(SEQ  ID NO.13)； 反向引物R.4 CTCCCCCCTGACATTACGTACACG(SEQ  ID NO.14)； 反向引物R.5 CTCCCCGCCGACATTACGTTCACG(SEQ  ID NO.15)； 反向引物R.6 CTCCCCCCCGACATTACGTTCACG(SEQ  ID NO.16)； 反向引物R.7 CTCCCCGCTGACAT TACGTTCACG(SEQ  ID NO.17)； 反向引物R.8 CTCCCCCCTGACATTACGTTCACG(SEQ  ID NO.18)；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115044712 A 2上述正向引物与反向引物可随机组合。 3.根据权利要求1 ‑2任一所述引物组合， 其特征在于， 所述引物能够特异性扩增人疱疹 病毒基因， 同时能够兼容 性扩增种属内不同序列的人疱疹病毒， 保证种属特异和种内兼容。 4.根据权利要求1 ‑3任一所述的引物组合， 其特征在于， 所述引物扩增的人疱疹病毒基 因组序列如下SEQ  ID NO.19‑23所示。 5.一种适于ONT测序平台的、 且用于感染样本中疱疹病 毒检测的种属间特异、 种属内兼 容的靶序列， 其特 征在于， 所述靶序列包括SEQ  ID NO.19‑23所示序列。 6.一种适于ONT测序平台的、 且用于感染样本中疱疹病 毒检测的检测试剂盒， 其特征在 于包含权利要求1 ‑4任一所述引物组合， 或权利要求5所述的靶序列。 7.权利要求1 ‑4任一所述的引物 组合或权利要求5所述的靶序列在制备适于ONT测序平 台的、 且用于感染样本中疱疹病毒检测的检测试剂盒中的应用。 8.权利要求1 ‑4任一所述的引物组合或权利要求5所述的靶序列在感染样本疱疹病毒 检测中的应用。 9.一种基于ONT测序平台的感染样本疱疹病 毒检测方法， 其特征在于， 包含利用权利要 求1‑4任一所述引物组合或权利要求6所述试剂盒对感染样本DNA进行扩增的步骤。 10.根据权利要求9所述的检测方法， 其特 征在于， 进一 步包括测序和生信分析步骤。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115044712 A 3