(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210413305.X (22)申请日 2022.04.20 (71)申请人 山西医科 大学 地址 030001 山西省太原市新建南路5 6号 (72)发明人 张更谦　严江伟　刘晋玎　张秀英　 李婧　刘垚　王佳琦　刘紫东　 (74)专利代理 机构 北京方圆嘉 禾知识产权代理 有限公司 1 1385 专利代理师 戴嵩玮 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种基于RT-RPA-LFD技术快速检测体液斑 的方法 (57)摘要 本发明属于生物医药技术领域， 具体涉及一 种用于法医常见体液斑RT ‑RPA‑LFD快速检测方 法。 本发明针对唾液斑和阴道分泌物斑对应设计 特异性检测引物对和探针， 利用本发 明所述引物 组可对体液斑进行快速鉴定， 简化了检测流程， 约30min即可完成整 套检测。 权利要求书2页 说明书9页 序列表2页 附图6页 CN 114672576 A 2022.06.28 CN 114672576 A 1.一种用于体液斑检测的RT ‑RPA‑LFD快速可视化引物组， 其特征在于， 所述RT ‑RPA‑ LFD快速可视化引物组包括引物组A和/或引物组B； 所述引物组A包括引物对STATH ‑RPA和探针STATH ‑RPA‑P； 所述引物对STATH ‑RPA的上游 引物STATH ‑RPA‑F1、 下游引物STATH ‑RPA‑R1和探针STATH ‑RPA‑P的核苷酸序列分别如SEQ   ID NO.1、 SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示； 所述引物组B包括引物对SPINK5 ‑RPA和探针SPINK5 ‑RPA‑P， 所述引物对SPINK5 ‑RPA的 上游引物SPINK5 ‑RPA‑F1、 下游引物SPINK5 ‑RPA‑R1和探针SPINK5 ‑RPA‑P的核苷酸序列分别 如SEQ ID NO.4、 SEQ ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示。 2.一种用于体液斑检测的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测体系， 其特征在于， 所述检测体 系包括权利要求1所述的引物组和核酸试纸条； 所述下游引物STATH ‑RPA‑R1和下游引物SPINK5 ‑RPA‑R1的5’端均修饰生物素基团 Biotin； 所述探针STATH ‑RPA‑P和探针SPINK5 ‑RPA‑P的5’端均修饰异硫氰酸荧光素基团FITC、 3’端均修饰间臂C 3‑spacer、 中间均修饰四氢呋喃THF。 3.根据权利要求2所述的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测体系， 其特征在于， 所述检测体系 包括试剂盒。 4.根据权利要求2所述的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测体系， 其特征在于， 所述核酸试纸 条为侧流层析 试纸条。 5.根据权利要求2～4任一项所述的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测体系， 其特征在于， 所 述RT‑RPA‑LFD快速可视化检测体系中还包括恒温快速扩增试剂和质量浓度为0.1％的 Tris‑HCl， 所述Tris ‑HCl的pH值 为8。 6.根据权利要求5所述的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测体系， 其特征在于， 所述恒温快速 扩增试剂包括RT ‑nfo RNA恒温快速扩增试剂盒。 7.权利要求1所述的RT ‑RPA‑LFD快速可视化引 物组或权利要求2～6任一项所述的RT ‑ RPA‑LFD快速可视化检测体系在体液斑 检测中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述体液斑包括唾液斑、 阴道分泌物斑、 包 括唾液斑的混合体液斑和包括阴道分泌物斑的混合体液斑中的任意 一种或多种。 9.一种检测体液斑的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测方法， 其特征在于， 所述RT ‑RPA‑LFD 快速可视化检测方法包括如下步骤： 以权利要求1所述的引物组对体液斑RNA进行RT ‑RPA扩增， 得到体液斑RT ‑RPA扩增产 物； 将所述体液斑RT ‑RPA扩增产物和0.1％的Tris ‑HCl混合， 将得到的混合物用核酸试纸 条进行检测， 进行 结果判读； 试纸条上同时出现C线和T 线， 则检测样本为目标体液； 试纸条上只出现C线， 无T 线， 则检测样本不是目标体液； 试纸条上未出现C线， 检测试纸条失效。 10.根据权利要求9所述的RT ‑RPA‑LFD快速可视化检测方法， 其特征在于， 所述体液斑 包括唾液斑、 阴道分泌物斑、 包括唾液斑的混合体液斑和包括阴道分泌物斑的混合体液斑 中的任意 一种或多种；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114672576 A 2所述体液斑RT ‑RPA扩增产物和0.1％的Tris ‑HCl的体积比为1： 19。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114672576 A 3