(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210409870.9 (22)申请日 2022.04.19 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 何俏军　蔡萱妍　杨波　王佳佳　 翁勤洁　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 赵杭丽 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C07K 16/18(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12Q 1/6883(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12N 15/113(2010.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 1/16(2006.01) (54)发明名称 Optineurin在制备诊断和治疗肝硬化药物 中的应用 (57)摘要 本发明提供一种Optineurin在制备诊断和 治疗肝硬化药物中的应用， 所述的OP TN包括靶向 OPTN蛋白的抗体、 靶向OPTN基因的引物和干扰 siRNAs。 本发明证明OPT N的mRNA和蛋白水平在肝 硬化肝组织中发生升高， 采用特异性靶向OP TN蛋 白的抗体能有效诊断肝硬化； OP TN蛋白缺失可显 著缓解肝硬化小鼠的肝纤维化症状； 在肝星状细 胞中应用靶向OPTN基因的干扰siRNAs， 可抑制 TGF‑β信号通路及诱导的肝星状细胞激活和胶 原分泌。 本发明可制备诊断和预测肝硬化的药 物， 或作为诊断肝硬化的特异性标志物， 使肝硬 化的临床诊断更加准确、 快速； 靶向OPTN基因的 siRNAs等可作为治 疗肝硬化的有效药物。 权利要求书1页 说明书4页 序列表5页 附图3页 CN 114790233 A 2022.07.26 CN 114790233 A 1.一种靶向Optineurin蛋白的抗体在制备诊断肝硬化药物中的应用， 其特征在于， 所 述OPTN蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID No.1所示， 所述 抗体为与OPTN蛋白特异性结合的抗体。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述药物为包含抗体以及一种或多种蛋白 保存所需辅料的混合物。 3.一种靶向OPTN基因的引物在制备诊断肝硬化药物中的应用， 其特征在于， 所述OPTN 基因的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示， 所述引物的核苷酸序列为： 正向引物1： 5 ’ ‑GAAAGAGCAGCGAGAGAGA AA‑3’(SEQ ID No.3)， 反向引物1： 5 ’ ‑CTCCGTCTTCGAAAGCATCA‑3’(SEQ ID No.4)； 或正向引物 2： 5’ ‑GGGAGCACAGAGA AAGAGAATG‑3’(SEQ ID No.5)， 反向引物 2： 5’ ‑AGCCTCTTGAAGCTCCTTAAAC‑3’(SEQ ID No.6)； 或正向引物3： 5 ’ ‑CCTAAGGGAAGGGAATCAGAAG‑3’(SEQ ID No.7)， 反向引物3： 5 ’ ‑CCTCTGTCTG GGTTTCAATCT‑3’(SEQ ID No.8)。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述药物为实时定量PCR、 原位杂交或基因 芯片诊断肝硬化的药物。 5.一种靶向OPTN基因的干扰siRNAs， 其特征在于， 所述OPTN基因编码蛋白的氨基酸序 列如SEQ ID No.1所示， 所述OPTN基因 的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示， 所述干扰siRNAs 的核苷酸序列分别为： SEQ ID No.9:5’ ‑GCCAUGAAGCUAAAUAAUCAA‑3’ SEQ ID No.10:5’ ‑CGUGAUGGAUUGCAUCAU UUA‑3’。 6.一种权利要求5所述干扰siRNAs在制备治疗肝硬化药物中的应用。 7.根据权利 要求6所述的应用， 其特征在于， 所述药物包括： 通过RNA干扰抑制OPTN基因 表达的双链核糖核酸， 或靶向OPTN基因的多肽类药物， 或靶向OPTN基因的改构病毒类药物， 或用于抑制OPTN蛋白活性的蛋白质， 或用于抑制OPTN蛋白功能的小分子化 合物。 8.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述药物的制 剂形式为液体制剂 或固体制 剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114790233 A 2Optineurin在制备诊断和治疗肝硬化 药物中的应用 技术领域 [0001]本发明属生物制药领域， 涉及Optineurin在制备诊断和治疗肝硬化药物中的应 用。 背景技术 [0002]肝硬化是多种致病因素长期作用导致细胞外基质(ECM)过度沉积形成纤维的进行 性肝损伤， 伴有腹水、 脓毒症、 肝性脑病、 肝肾综合征等并发症， 若不及时治疗会导致多脏器 功能衰竭甚至肝癌， 最终导致患者死亡。 肝星状细胞(Hepatic  Stellate  Cells,HSCs)的激 活是导致ECM过度沉积引起肝硬化的关键原因： HSCs受多种刺激因子诱导激活， 激活的HSC 合成分泌大量胶原蛋白， 导致ECM过度沉积形成纤维， 引起肝硬化。 在我国， 肝硬化非常普 遍， 毒物和药物性肝病、 胆汁淤积性肝病、 病毒性肝炎、 酒精性和非酒精性脂肪肝炎等多种 慢性肝病均可引起肝硬化。 临床上通过血常规(谷丙转氨酶、 谷草转氨酶、 免疫性蛋白)、 腹 腔积液等检查评估肝功能， 通过影像学和肝穿刺活检对肝硬化进 行H&E染色进 行病理诊断。 但肝硬化病因多样、 病理动态变化及病情的复杂性， 使肝硬化的早期诊断较为困难， 大多 数 病人在中后期才被诊断而被耽误了治疗。 因此， 实现肝硬化诊断的精准性和有效性对肝硬 化的防治具有重要意 义。 [0003]肝硬化的临床治疗手段非常有限， 目前临床上主要通过去除致病因素减轻肝脏持 续损伤， 缓解肝硬化进程， 比如， 采用抗病毒 药物清除慢 性肝炎病毒， 治疗病毒性肝硬化； 采 用激素和免疫抑制剂治疗免疫性肝硬化。 当前缺 乏有效的抗肝硬化药物， 肝硬化严重者只 能通过肝移 植治疗。 此外， 尽管有效的病因治疗可缓解部 分纤维形成， 但某些肝病如遗传代 谢性肝病缺乏病因治疗， 纤维无法得到缓解。 因此， 临床上急需 高效的抗 肝硬化治疗药物。 [0004]Optineurin(视神经蛋白)蛋白是由OPTN基因编码， 被认为是原发性开角型青光 眼、 肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病的病理学标记 蛋白。 Optineurin蛋白广泛参与多 种细胞过程， 包括调控高尔基体膜运输、 抗病毒先天免疫反应、 细胞有丝分裂、 核因子 ‑κB (NF‑κB)通路等。 现有研究指出OPTN在肝癌患者的肿瘤组织中呈现低表达， 但至今尚没有其 对肝星状细胞和肝硬化作用的报道。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供Optineurin在制备诊断和治疗肝硬化药物中的应用， 是一种 靶向Optineurin(OPTN)蛋白的抗体在制备诊断和治疗肝硬化药物中的应用， OPTN可作为肝 硬化疾病的标记分子， 本发 明可提高肝硬化诊断的准确性。 所述OPTN蛋白氨基酸序列如S EQ  ID No.1所示。 所述抗体为能与OPTN蛋白特异性结合的抗体， 包括在小鼠、 大鼠、 兔、 山羊和 其他免疫动物为宿主制备 的单/多克隆抗体， 采用杂交瘤技术制备 的单克隆抗体以及基因 工程抗体。 [0006]所述药物为包含抗体以及 一种或多种蛋白保存所 需辅料的混合物， 所述辅料优选 为叠氮化钠、 明胶、 甘油、 三羟甲基氨基甲烷 等。 所述混合物pH值 为7.3‑7.4。说　明　书 1/4 页 3 CN 114790233 A 3