(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210400038.2 (22)申请日 2022.04.15 (71)申请人 中国农业科 学院北京畜牧兽医研究 所 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 蒋琳　李业芳　张政凯　马月辉　 浦亚斌　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 孙怡 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检 测方法和应用 (57)摘要 本发明涉及分子标记 技术领域， 具体公开了 一种与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检测方 法和应用。 本发明的SNP分子标记位于山羊第4号 染色体第53175525bp位点； 所述位点上存在T/C 碱基突变， 与山羊耐热性状具有显著的相关性。 本发明的SNP标记能够用于山羊分子标记辅助育 种。 本发明提供的分子标记不受山羊的年龄、 性 别等限制， 能够用于耐热山羊选育， 甚至刚出生 即可进行准确地筛选， 能够显著促进耐热性山羊 选育的育种进程。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114854873 A 2022.08.05 CN 114854873 A 1.与山羊耐热性状相关的SNP分子标记， 其特征在于， 所述SNP分子标记位于SEQ  ID  NO.3所示序列的第373位， 其多态性形式为T/ C。 2.根据权利 要求1所述的SNP分子标记， 其特征在于， 当所述SNP分子标记的多态性位点 的基因型为CC时， 对应于山羊耐热性高， 当所述SNP分子标记的多态 性位点的基因型为TC或 TT时， 对应于山羊耐热性低。 3.用于扩增权利要求1或2所述的SNP分子标记的引物组。 4.根据权利要求3所述的引物组， 其特征在于， 所述引物组包括正向引物和反向引物； 所述正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示； 所述反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID  No.2所示。 5.含有权利要求3或4所述的引物组的试剂或试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括 dNTPs Mixture、 TaKaRa  Ex Taq DNA聚合酶、 PCR反应缓冲液、 标准阳性模板中的至少一种。 6.鉴定或选 育耐热山羊品种的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)提取待测山羊的基因 组DNA； 2)以待测山羊的基因 组DNA为模板， 利用SEQ  ID NO:1‑2所示的引物进行PCR扩增反应； 3)分析PCR扩增产物。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所用PCR扩增反应体系以50μl计 包括： 50～100ng/μl待测山羊的基因组DNA  1μl， 10pmol/μl正向引物和反向引物各1μl， 10mmol/L  dNTPs Mixture 1 μl， 1.25U/2 5 μl TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶1 μl， 2 ×PCR反应缓 冲液25 μl和余 量的双蒸水。 8.根据权利 要求6所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所用PCR扩增反应程序为： 95℃预 变性5min； 95℃变性30s， 55℃或60℃退火30s， 72℃延伸1 ‑2min， 共30 ‑35个循环； 72℃保温 2min。 9.根据权利 要求6‑8任一项所述的方法， 其特征在于， 步骤3)包括： 检测 PCR扩增产物第 373bp处的基因型， 基因型为C C的个体耐热性显著高于TC、 T T基因型。 10.权利要求1或2所述的SNP分子标记、 权利要求3或4所述的引物组或权利要求5所述 的试剂或试剂盒的以下任一应用： (1)用于耐热山羊品种的鉴定及改良； (2)用于山羊耐热性状早期预测； (3)用于与山羊耐热性状相关的分子标记辅助育种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854873 A 2一种与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检测方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子标记技术领域， 具体地说， 涉及一种与山羊耐热性状相关的S NP标 记及其检测方法和应用。 背景技术 [0002]CPVL基因编码的蛋白是羧肽酶， 与丝氨酸羧肽酶有着很强的序列相似性。 羧肽酶 是一大类蛋白酶， 其作用是从蛋白质或肽段 的羧基末端切割 单个氨基酸。 该蛋白可能参与 溶酶体中吞噬性颗粒的消化过程， 参与炎症蛋白酶级 联反应， 以及修剪肽段以呈递抗原。 当 该基因发生 突变时， 可能影响哺乳动物体内的免疫反应过程。 [0003]随着气温逐步升高和集约化养殖加剧， 山羊对热环境的适应性问题逐渐成为规模 化养殖场不得不面临的一项挑战。 山 羊处于极端的高温环境下， 机体会出现热应激， 进而在 生理、 泌乳、 繁殖等环节给行业造成损失。 山羊对热环境的适应性是一个复杂的生物过程， 涉及到许多不同的生物过程和调节蛋白。 近年来， 分子遗传技术的飞速发展， 使DNA  分子标 记技术在山 羊遗传多样性研究中起着重要作用， 为更好地开 发和利用优良品种的优良经济 特性及保护和 合理的利用品种资源。 因此有必要开发山羊特异的分子标记， 应用于耐热性 山羊的选 育， 并为耐热性 山羊的分子 育种提供一定的理论依据。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种与山羊耐热性状相关的SNP标记及其检测方法和应用。 [0005]具体地， 本发明的技 术方案如下： [0006]本发明提供一种与山羊耐热性状相关的SNP分子标记， 所述SNP分子标记位于SEQ   ID NO.3所示序列的第373位， 其多态性形式为T/ C。 [0007]本发明中， 当所述SNP分子标记的多态性位点的基因型为CC时， 对应于山羊耐热性 高， 当所述SNP分子标记的多态性 位点的基因型为TC或T T时， 对应于山羊耐热性低。 [0008]本发明在高温和低温环境下山羊群体中进行选择信号筛选， 发现CPVL基因座位的 多态性变异对山 羊热适应性的影响达到显著水平。 所述SNP分子标记位于山 羊第4号染色体 第53175525bp位点； 所述位点上存在T/C碱基突变， 与山羊耐热性状具有显著的相关性； 该 基因存在CC、 TC和TT三种基因型， CC基因型的个体耐热性显著高于TC基因型以及 TT基因型； 所述SNP分子标记基于山羊基因 组序列信息版本号ASM1704 41v1， 2016年8月。 [0009]在本发明中， 在山羊第4号染色体第53175525bp位点， 等位基因C在热环境山羊中 的频率高达61.20％， 而在常温、 低温和极低温环境山羊中的频率只有8.83％。 对于通过基 因型区分和筛选出山 羊耐热性状的山 羊具有较大的指导意义， 能够提高耐热山羊筛选的准 确率和效率。 [0010]本发明还提供用于扩增上述SNP分子标记的引物组。 [0011]优选， 所述引物组包括正向引物和反向引物； 所述正向引物的核苷酸序列如SEQ   ID No.1所示， 具体为： 5 ’ ‑GGCATCCGACTCCTTCCAAT ‑3’； 所述反向引物的核苷酸序列如SEQ  说　明　书 1/5 页 3 CN 114854873 A 3