(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210394917.9 (22)申请日 2022.04.15 (71)申请人 河南省农业科 学院芝麻研究中心 地址 450000 河南省郑州市金 水区花园路 116号 (72)发明人 苗红梅　张海洋　马琴　李春　 段迎辉　琚铭　郭秋月　王慧丽　 徐芳芳　曹恒春　张战有　 (74)专利代理 机构 郑州联科专利事务所(普通 合伙) 41104 专利代理师 张晓萍 (51)Int.Cl. C12N 15/29(2006.01) C12N 15/82(2006.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C07K 14/415(2006.01) A01H 5/00(2018.01) A01H 6/66(2018.01) (54)发明名称 芝麻核雄 性不育基因Si4cll1及其SNP标记 (57)摘要 本发明属于芝麻分子遗传育种技术领域， 具 体涉及一个控制芝麻核雄性不育性状的基因 Si4cll1及其对应的SNP标记 SiSNPms‑3。 该基因 位于芝麻第3 条染色体上， 长度为2 331bp； 该基因 属于隐性控制基因， 控制表型为花粉败育型。 本 申请中， 发明人以现有核 雄性不育突变体 ms1812 材料为基础， 研究并克隆了调控 ms1812核雄性不 育性状的目的基因Si4cll1， 并开发了首个芝麻 核雄性不育基因 （SNP） 标记 。 基于这些成果， 可为 芝麻等农作物核雄性不育性状调控发育机理研 究奠定理论基础， 同时也可为芝麻的分子辅助育 种技术发展、 芝麻杂交种新品种筛选及新品种培 育提供材料基础， 因此具有较好的科研价值和经 济应用价值。 权利要求书2页 说明书12页 序列表3页 附图3页 CN 114591973 A 2022.06.07 CN 114591973 A 1.芝麻核雄性不育基因 Si4cll1， 其特征在于， 该基因位于芝麻第 3条染色体上， 长度为 2331bp； 该基因属于隐性控制基因， 控制 表型为花粉败育型； 其碱基序列如SEQ  ID No.1所 示。 2.权利要求1所述芝麻核雄性不育基因 Si4cll1的可育等位基因Si4CLL1， 其特征在于， 该基因所对应植株表型为 正常花粉可育型， 其碱基序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.权利要求1所述芝麻核雄性不育基因 Si4cll1所编码Si4cll1突变蛋白， 其特征在于， 编码543个氨基酸； MGTDAQNLKQEEIIFRSKYPPVQVPDDVTLPEFVLSNVELYQDKVAFVDSVTGKGCTYGEVS RDVKRFSRAL RSLGLRKGRVVVVLLPNVPVYATIALGIMAA GGIFSGANPSAHASEIKKQAEAADAKLVVTDGSTYHKVKDLGLPV IIHGEDRVEGTIYWDELLEAADKASADTTDD KVQQTDICALP FSSGTTGLS KGVMLTHRNLVANLCSSLFSV GPEL VGQITILGLIP FFHKYGLTGICCATIRNKGKVVVMRRYELRAFLKALITHQVTFAPIVPPIVLGLVKNPIVDEFDL SKLRLRSIMTAAAPLAPEILNEFEKKFPGVEVQEAYGMTEHSCITLTHGDPNKGHGIAKKNSVGFILPNLEVKFVD PESGKSLP KNTPGEICVRSQCVMKGYYKNEHETTLTID KDGWLHTGDIGYIDDDEDVFIVDRIKELIKYKGFQVAP AELEAILLSHPSVEDAAVVGIPDDEA GEIPAACVVMNNKAKESEEDMMGYVSSNVASYKRVRVLQFVDAIP KSPSG KIMRRLIKENMVKTL。 4.权利要求2所述芝麻核雄性不育基因 Si4cll1的等位基因Si4CLL1所编码Si4CLL1蛋 白， 其特征在于， 编码543个氨基酸； MGTDAQNLKQEEIIFRSKYPPVQVPDDVTLPEFVLSNVELYQDKVAFVDSVTGKGCTYGEVS RDVKRFSRAL RSLGLRKGRVVVVLLPNVPVYATIALGIMAA GGIFSGANPSAHASEIKKQAEAADAKLVVTDGSTYHKVKDLGLPV IIHGEDRVEGTIYWDELLEAADKASADTTDD KVQQTDICALP FSSGTTGLS KGVMLTHRNLVANLCSSLFSV GPEL VGQITILGLIP FFHIYGLTGICCATIRNKGKVVVMRRYELRAFLKALITHQVTFAPIVPPIVLGLVKNPIVDEFDL SKLRLRSIMTAAAPLAPEILNEFEKKFPGVEVQEAYGMTEHSCITLTHGDPNKGHGIAKKNSVGFILPNLEVKFVD PESGKSLP KNTPGEICVRSQCVMKGYYKNEHETTLTID KDGWLHTGDIGYIDDDEDVFIVDRIKELIKYKGFQVAP AELEAILLSHPSVEDAAVVGIPDDEA GEIPAACVVMNNKAKESEEDMMGYVSSNVASYKRVRVLQFVDAIP KSPSG KIMRRLIKENMVKTL。 5.针对权利要求1或2所述芝麻核雄性不育基因 Si4cll1或其可育等位基因Si4CLL1的 PCR扩增用引物对， 其特 征在于， 引物对设计为： 正向引物DWF1  Primer F： 5'‑  GGGGTGGGGTGAAAGACAA  ‑3'； 反向引物DWF1  Primer R： 5'‑  TCGCCAACACAAATGACAGG  ‑3'。 6.利用权利5所述PCR扩增用引物对制备获得芝麻核雄性不育基因 Si4cll1或其可育等 位基因Si 4CLL1的PCR扩增方法， 其特 征在于， 该 方法包括如下步骤： （1） 提取核雄 性不育型种质或育性 正常芝麻样本的基因 组DNA； （2） 以步骤 （1） 中所提取的基因 组DNA为模板， 利用PCR扩增用引物对进行PCR扩增； 以核雄性不育型种质DNA为模板时， PCR扩增所 得为芝麻核雄 性不育基因 Si4cll1； 以育性正常芝麻样本的基因 组DNA为模板时， PCR扩增所 得为基因Si 4CLL1。 7.如权利要求6所述的PCR扩增方法， 其特征在于， 所述核雄性不育型种质为芝麻核雄 性不育材料ms1812； 所述正常芝麻样本为豫芝1 1。 8.权利要求1所述芝麻核雄性不育基因 Si4cll1 在芝麻育种中应用， 其特征在于， 用于 构建芝麻雄 性不育种质材 料。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114591973 A 29.对权利要求1或2所述芝麻核雄性不育基因 Si4cll1及其可育等位基因Si4CLL1的SNP 标记检测用引物对， 其特征在于， 所述SNP标记命名为 SiSNPms‑3， 所述引物对用于HRM  PCR 检测用， 所述引物对具体设计为： HS4cll1‑F序列： 5' ‑GAGTTCATACCGACGCATCAC C‑3'； HS4cll1‑R序列： 5'  –TAATCTCTGCTC CAGCCTCTTCA‑3'。 10.权利要求9所述检测用引物对在芝麻分子育种中应用， 其特征在于， 用于检测判定 雄性不育种质材 料。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114591973 A 3