(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210378685.8 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 东南大学 地址 210096 江苏省南京市玄武区新 街口 街道四牌楼 2号 (72)发明人 樊红　沈小慧　李懿萍　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 沈利芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/113(2010.01) C12Q 1/02(2006.01) (54)发明名称 胃癌化疗 药物敏感性的检测方法、 试剂盒及 NSUN2检测的应用 (57)摘要 本发明涉及生物 技术领域， 尤其是胃癌化疗 药物敏感性的检测方法、 试剂盒及NSUN2检测的 应用， 现提出如下方案， 胃癌化疗药物敏感性检 测试剂盒包括针对NSUN2基因的扩增引物和 NSUN2基因的干扰序列， 试剂盒中的试剂还包括 顺铂和/或检测NS UN2的试剂； 胃癌化疗药物敏 感 性的检测方法利用小干扰RNA慢病毒载体感染胃 癌组织细胞， 敲低胃癌组织细胞中NSUN2表达含 量， 得到第一组织细胞， 再利用所述化疗药物处 理第一组织细胞得到第二组织细胞， 培育第二组 织细胞， 通过检测第二组织细胞的增值能力来判 断胃癌化疗药物敏感性。 本发明可以并利用 shRNA干扰实验敲低NSU N2的表达 水平， 并结合该 分子对胃癌预后的预测， 评估胃癌患者顺铂治疗 疗效和预后情况， 整个评估流程简便易行， 可行 性高。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图3页 CN 114540502 A 2022.05.27 CN 114540502 A 1.一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒， 其特征在于， 包括如下试剂： 针对NSUN2基因 的扩增引物和NSUN2基因的干扰序列。 2.根据权利要求1所述的一种胃癌 化疗药物敏感性检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中的试剂还 包括顺铂和/或检测NSUN2的试剂。 3.根据权利要求1所述的一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒， 其特征在于， 所述 NSUN2基因的干扰序列包括： 干扰序列1： 5 ’ ‑GAGCGAUGCCUUAGGAUAUUA ‑3’； 干扰序列2： 5 ’ ‑ CCCAAGAAUGAACGGCUUCAU‑3’。 4.根据权利要求1所述的一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒， 其特征在于， 所述 NSUN2基因的扩增引物包括上游引物： 5 ’ ‑AUCUUGAGAAAAUCGCCACAC ‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑ AUCAUUCGCAAUAACAAAUCCCU‑3’。 5.一种NSUN2基因 的干扰序列在制备用于评估胃癌 顺铂化疗药物敏感性的试剂 盒中的 应用。 6.NSUN2用作胃癌化疗药物敏感性评估标记 物， 所述化疗药物包括 顺铂。 7.NSUN2的检测在胃癌化疗耐药评估中的应用或NSUN2的检测在在制备用于评估胃癌 顺铂化疗药物敏感性的试剂盒中的应用。 8.一种胃癌 化疗药物敏感性的检测方法， 其特征在于， 利用小干扰RNA慢病 毒载体感染 胃癌组织细胞， 敲低胃癌组织细胞中NSUN2表达含量， 得到第一组织细胞， 再利用所述化疗 药物处理第一组织细胞得到第二组织细胞， 培育第二组织细胞， 通过检测第二组织细胞 的 增值能力来判断 胃癌化疗药物敏感性。 9.根据权利要求8所述的一种胃癌 化疗药物敏感性的检测方法， 其特征在于， 所述化疗 药物包括顺铂， 所述小干扰RNA的序列包括： 干扰序列1： 5 ’ ‑GAGCGAUGCCUUAGGAUAUUA ‑3’； 干 扰序列2： 5 ’ ‑CCCAAGAAUGAACGGCUUCAU‑3’。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540502 A 2胃癌化疗药物敏感性的检测方 法、 试剂盒及NSUN2检测的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 尤其是胃癌化疗药物敏感性的检测方法、 试剂盒及 NSUN2检测的应用。 背景技术 [0002]胃癌是最具有侵袭和转移特性的恶性肿瘤之一， 顺铂等化疗药物治疗是临床治疗 胃癌的重要手段之一， 对于组织学证实的晚期胃癌且未接受过化疗的患者来说， 基于顺铂 (cisplatin， CDDP)的化疗被视为一线治疗， 尽管多年研究使得 胃癌病因方面取得了进展， 但许多患者的化疗效果仍然欠佳， 究其原因， 胃癌细胞对药物敏感性或药物耐受性不清楚， 导致无法合理应用化疗药物， 无效化疗； 现有技术中的对胃癌细胞对顺铂 药物的耐受性的 检测尚无良好的方法。 本申请提出了利用检测胃癌细胞中的NSUN2的表达量评估胃癌对顺 铂的耐药性， NSUN2表达量越高， 顺铂治疗约不敏感， 通过检测胃癌患者NSUN2表达水平， 以 确定是否需要 使用顺铂药物来 化疗。 [0003]为此， 本发明提出了胃癌化疗药物敏感性的检测方法、 试剂盒及NSUN2检测的应 用。 发明内容 [0004]为解决现有技术中的问题， 本发明提出了胃癌化疗药物敏感性的检测方法、 试剂 盒及NSUN2检测的应用。 [0005]经研究发现， NSUN2在胃癌组织中呈现高水平表达， 且高表达与患者的预后不良密 切相关。 通过2条NSUN2的慢病毒shRNA干扰序列敲低胃癌NSUN2的表达水平后， 明显抑制了 胃癌细胞的生长， 且最为重要的是， 抑制NSUN2表达后， 胃癌细胞对顺铂治疗的敏感性提高 了， 提示小干扰RNA敲低NSUN2的表达有望成为提高胃癌化疗敏感性方案； 据此， 我们 提出： 检测NSUN2基因表达量之后， 敲低NSUN2的表达进而应用顺铂药物治疗胃癌的方案， ， 降低胃 癌死亡率。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用了如下技 术方案： [0007]一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒， 包括如下试剂： 针对NSUN2基因的扩增引物 和NSUN2基因的干扰序列。 [0008]进一步地， 所述试剂盒中的试剂还 包括顺铂和/或检测NSUN2的试剂。 [0009]进 一 步 地 ，所 述 N S U N 2 基 因 的 干 扰 序 列 包 括 ：干 扰 序 列 1 ：5 ’‑ GAGCGAUGC CUUAGGAUAUUA‑3’； 干扰序列2： 5 ’ ‑CCCAAGAAUGAACGGCUUCAU‑3’。 [0010]进 一 步 地 ，所 述 N S U N 2 基 因 的 扩 增 引 物 包 括 上 游 引 物 ：5 ’‑ AUCUUGAGAAAAUCGCCACAC‑3’； 下游引物： 5 ’ ‑AUCAUUCGCAAUAACAAAUCCCU‑3’。 [0011]一种NSUN2基因的干扰序列在制备用于评估胃癌顺铂化疗药物敏感性的试剂盒中 的应用。 [0012]NSUN2用作胃癌化疗药物敏感性评估标记 物， 所述化疗药物包括 顺铂。说　明　书 1/8 页 3 CN 114540502 A 3