(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210378482.9 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 长沙中南大 学湘雅医学检验所 地址 410000 湖南省长 沙市开福区湘雅路 110号 (72)发明人 李清　周宏灏　李书　陈焱　朱鹏　 杨礼　安宇航　 (74)专利代理 机构 湖南弘一 律师事务所 4325 5 专利代理师 邱海平 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测维生素D易 感基因多态 性的引 物组、 探针组、 试剂盒及方法 (57)摘要 本申请提供了一种用于检测维生素D易 感基 因多态性的引物组、 探针组、 试剂盒及方法， 易感 基因选自GC  rs4588、 CYP2R1  rs10741675和 CYP24A1 rs2209314， 第一引物组用于GC  rs4588 的扩增， 且碱基序列如SEQ  ID No.1~2所示； 第二 引物组用于CYP2R1  rs10741675的扩增， 且碱基 序列如SEQ  ID No.5~6所示； 第三引物组用于 CYP24A1 rs2209314的扩增， 且碱基序列如SEQ   ID No.9~10所示。 本申请提供的用于检测维生素 D易感基因多态性的引物组、 探针组、 试剂盒及方 法， 能够快速和准确的检测人体维生素D易感基 因多态性。 权利要求书2页 说明书12页 序列表4页 附图4页 CN 114525334 A 2022.05.24 CN 114525334 A 1.一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物 组， 其特征在于， 所述易感基因选自GC   rs4588、 CYP2R1  rs10741675和CYP24A1  rs2209314， 所述引物组包括第一引物组、 第二引物 组和第三引物组； 所述第一引物组用于所述GC  rs4588的扩增， 所述第一引物组包括第一上游引物和第 一下游引物， 所述第一上游引物的碱基序列如SEQ  ID No.1所示， 所述第一下游引物的碱基 序列如SEQ  ID No.2所示； 所述第二引物组用于所述CYP2R1  rs10741675的扩增， 所述第二引物组包括第二上游 引物和第二下游引物， 所述第二上游引物的碱基序列如SEQ  ID No.5所示， 所述第二下游引 物的碱基序列如SEQ  ID No.6所示； 所述第三引物组用于所述CYP24A1  rs2209314的扩增， 所述第三引物组包括第三上游 引物和第三下游引物， 所述第三上游引物的碱基序列如SEQ  ID No.9所示， 所述第三下游引 物的碱基序列如SEQ  ID No.10所示。 2.一种用于检测维生素D易感基因多态性的探针组， 其特征在于， 所述易感基因选自GC   rs4588、 CYP2R1  rs10741675和CYP24A1  rs2209314， 所述探针组包括： 如权利要求1中所述 的引物组、 第一探针组、 第二探针组和第三探针组； 所述第一探针组用于与所述GC  rs4588扩增的核酸序列进行杂 交， 所述第一探针组的 序列如SEQ  ID No.3和SEQ ID No.4所示； 所述第二探针组用于与所述CYP2R1  rs10741675扩增的核酸序列进行杂交， 所述第二 探针组的序列如SEQ  ID No.7和SEQ ID No.8所示； 所述第三探针组用于与所述CYP24A1  rs2209314扩增的核酸序列进行杂交， 所述第三 探针组的序列如SEQ  ID No.11和SEQ ID No.12所示。 3.根据权利要求2所述的探针组， 其特征在于， 所述第 一探针组的5 ’修饰有第 一荧光报 告基团， 所述第一探针组的3 ’修饰有第一荧光淬灭基团， 所述第一荧光报告基团选自FAM或 VIC， 所述第一 荧光淬灭基团选自MGB； 所述第二探针组的5 ’修饰有第二荧光报告基团， 所述第二探针组的3 ’修饰有第二荧光 淬灭基团， 所述第二 荧光报告基团选自FAM或VIC， 所述第二 荧光淬灭基团选自MGB； 所述第三探针组的5 ’修饰有第三荧光报告基团， 所述第三探针组的3 ’修饰有第三荧光 淬灭基团， 所述第三 荧光报告基团选自FAM或VIC， 所述第三 荧光淬灭基团选自MGB。 4.一种用于检测维生素D易感基因多态性的试剂盒， 其特征在于， 包括PCR反应液， 所述 PCR反应液包括权利要求1中所述引物组、 权利要求2或3中所述的探针组、 PCR缓冲液、 dNTPs、 DNA聚合酶和无核酸酶水。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括： 阳性对照和阴性对 照。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述阳性对照包括第一阳性对照、 第二 阳性对照和第三阳性对照， 所述阴性对照为无核酸酶水； 其中， 所述第一阳性对照包括所述GC  rs4588基因位点的野生型质粒、 所述CYP2R1   rs10741675基因位 点的野生型质粒和所述C YP24A1 rs2209314基因位 点的野生型质粒； 所述第二阳性对照包括所述GC  rs4588基因位点的杂合型质粒、 所述CYP2R1   rs10741675基因位 点的杂合型质粒和所述C YP24A1 rs2209314基因位 点的杂合型质粒；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114525334 A 2所述第三阳性对照包括所述GC  rs4588基因位点的突变型质粒、 所述CYP2R1   rs10741675基因位 点的突变型质粒和所述C YP24A1 rs2209314基因位 点的突变型质粒。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述第一阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/ μL； 所述第二阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/ μL； 所述第三阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/ μL。 8.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述PCR反应液中的第一引物组中的引 物和第一探针组中的探针的浓度分别为0.4 μM  ~0.8 μM； 所述PCR反应液中的第二引物组中的引物和第二探针组中的探针的浓度分别为0.4μM   ~0.8 μM； 所述PCR反应液中的第三引物组中的引物和第三探针组中的探针的浓度分别为0.4μM   ~0.8 μM。 9.一种用于检测维生素D易感基因多态性的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 对待测样品进行稀释处 理； 取适量的PCR反应液与稀释后的待测样品混合， 以进行实时荧 光定量PCR； 根据实时荧光定量PCR所获取的荧光强度， 以得到所述维生素D易感基因多态性的检测 结果； 根据所述检测结果 来判断目标对象的维生素D缺乏的遗传风险。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特 征在于， 所述实时荧 光定量PCR的扩增程序包括： 预变性， 95℃5mi n， 共进行1个 循环； 预扩增， 95℃15s， 6 0℃30s， 共进行5个 循环； 扩增， 95℃15s， 6 0℃30s， 采集荧光， 共进行45个 循环。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114525334 A 3