(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210366517.7 (22)申请日 2022.04.08 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114717302 A (43)申请公布日 2022.07.08 (73)专利权人 中国水产科 学研究院黑龙江水产 研究所 地址 150070 黑龙江省哈尔滨市道里区河 松街232号 (72)发明人 胡雪松　李池陶　贾智英　葛彦龙　 姜晓娜　石潇丹　石连玉　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市文 洋专利代理事务 所(普通合伙) 23210 专利代理师 范欣(51)Int.Cl. C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) 审查员 马艳林 (54)发明名称 一种区分三角鲂性别的分子标记、 试剂盒及 区分方法 (57)摘要 一种区分三角鲂性别的分子标记、 试剂盒及 区分方法， 本发 明区分三角鲂性别的分子标记的 引物对为HLJFLf3和HLJFLr 3。 区分三角鲂性别的 方法： 一、 提取待测三角鲂样本基因组DNA； 二、 以 提取的基因组DNA为模板， 以HLJFLf3和HLJFLr3 为引物进行PCR扩增， 获得PCR产物； 三、 对PCR产 物进行电泳检测， 电泳结果出现582bp条带的对 应样本为雄性， 无扩增条带的样本为雌性。 本发 明公开了三角鲂的性别特异性分子标记以及性 别鉴定方法， 能够在三角鲂早期发育阶段确定个 体性别， 进而控制后备亲鱼群体的性比， 降低养 殖和维护成本。 本发明在三角鲂早期发育阶段便 可确定个体性别， 为研究三角鲂性别 与生长等商 业性状之间的关联奠定 了基础。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114717302 B 2022.10.04 CN 114717302 B 1.一种区分三角鲂性别的分子标记， 其特征在于该分子标记的引物对为HLJFLf3和 HLJFLr3， 具体序列为： HLJFLf3： 5' ‑GATGATGGTCAAATGAACTAG‑3'； HLJFLr3： 5' ‑ATGGGATGGAGCAATGCAATG‑3'。 2.一种区分三角鲂性别的试剂盒， 其特征在于该试剂盒包括分子标记引物对HLJFLf3 和HLJFLr3； 其中， HLJFLf3和HLJFLr3的具体序列为： HLJFLf3： 5' ‑GATGATGGTCAAATGAACTAG‑3'； HLJFLr3： 5' ‑ATGGGATGGAGCAATGCAATG‑3'。 3.根据权利要求2所述的区分三角鲂性别的试剂盒， 其特征在于该试剂盒还包括去离 子水、 10×Taq Buffer、 MgCl2、 dNTPs和TaqDNA  聚合酶。 4.区分三角鲂性别的方法， 其特 征在于该 方法按以下步骤进行： 一、 提取待测三角鲂 样本基因 组DNA； 二、 以提取的基因组DNA为模板， 以HLJFLf3和HLJFLr3为引物进行PCR扩增， 获得PCR产 物； 三、 对PCR产物进行电泳检测， 电泳结果出现582bp条带的对应样本为雄性， 无扩增条带 的样本为雌性， 即完成三角鲂的性别鉴定； 其中， 所述HLJFLf3和HLJFLr3的具体序列为： HLJFLf3： 5' ‑GATGATGGTCAAATGAACTAG‑3'； HLJFLr3： 5' ‑ATGGGATGGAGCAATGCAATG‑3'。 5.根据权利要求4所述的区分三角鲂性别的方法， 其特征在于步骤二中PCR扩增体系如 下： 成分                                用量 去离子水                            13.8µL 10×Taq Buffer                      2µL MgCl2                                               1.6µL 10mM dNTPs                          0.4µL 10µM 引物HLJFLf3                     0.6µL 10µM 引物HLJFLr3                     0.6µL 5U/  µL Taq DNA 聚合酶               0.08µL 100ng/µL基因组DNA                   1.0  µL 6.根据权利要求4所述的区分三角鲂性别的方法， 其特征在于步骤二中PCR扩增条件 为： 94℃预变性3min； 94℃变性30s、 56℃退火30s、 72℃延伸30s， 共30个循环； 再72℃延伸 5min， 4℃保温。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114717302 B 2一种区分三角鲂性别的分子标记、 试剂盒及区分方 法 技术领域 [0001]本发明涉及一种区分三角鲂性别的分子标记、 试剂盒及区分方法。 背景技术 [0002]鲂属鱼类是我国淡水鱼家族中的重要一员， 其主要包括分布于长江中下游大型湖 泊中广为人知的团头鲂(武昌鱼)、 长江上游的厚颌鲂、 珠江和海南水系的广东鲂以及广泛 分布于多个水系的三角鲂。 [0003]三角鲂个体大、 肉质好， 适合不同地域消费者的烹饪及饮食习惯， 且该鱼易饲养、 易起捕、 抗病抗逆性 强， 适合池塘、 网箱 等多种养殖方式。 尽管有 学者指出， 三角鲂有望成为 继团头鲂之后最具养殖潜力的鲂属鱼类， 但不可否认的是三角鲂在养殖量、 市场认可度、 品 种选育等方面均远不及团头鲂。 目前， 由于过度捕捞和环境破坏等原因， 三角鲂仅存黑龙 江、 浙江杭州 钱塘江和湖北红安金沙河水库3个自然分布的种群。 利用现代分子遗传学手 段， 开展三角鲂的种质特性和新品种培 育研究势在 必行。 [0004]根据近几年的调查， 野生黑龙江三角鲂需7龄方能达到性成熟。 在养殖条件下， 黑 龙江三角鲂性成熟年龄约需5龄， 南方种群需3龄。 三角鲂在性 成熟前的个体发育早期阶段， 无明显的性别特征。 对于性 成熟晚、 成熟时个体相对较大的养殖鱼类来说， 亲鱼的培育周期 长， 群体养殖和维护成本较高。 育种企业若能通过性别的早期鉴定随时掌控后备亲鱼群体 的性比， 则可适当减少亲本的培育数量， 从而有效降低养殖和维护成本， 提高整体经济效 益。 发明内容 [0005]本发明提供了一种区分三角鲂性别的分子标记、 试剂盒及区分方法。 [0006]本发明区分三角鲂性别的分子标记的引物对为HLJFLf3和HLJFLr3， 具体序列为： [0007]HLJFLf3： 5' ‑GATGATGGTCAAATGAACTAG‑3'； [0008]HLJFLr3： 5' ‑ATGGGATGGAGCAATGCAATG‑3'。 [0009]进一步， 黑龙江三角鲂的性别分子标记核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示； 钱塘江三 角鲂和金沙河水库三角鲂的性别分子标记核苷酸序列如SEQ  ID NO： 2所示。 [0010]黑龙江三角鲂的性别分子标记与钱塘江三角鲂和金沙河水库三角鲂的性别分子 标记均为582bp。 [0011]区分三角鲂性别的试剂盒包括分子标记引物对HLJFLf3和HLJFLr3。 HLJFLf3： 5' ‑ GATGATGGTCAAATGAACTAG‑3'； HLJFLr3： 5' ‑ATGGGATGGAGCAATGCAATG‑3'。 [0012]区分三角鲂性别的方法： [0013]一、 提取待测三角鲂 样本基因 组DNA； [0014]二、 以提取的基因组DNA为模板， 以HLJFLf3和HLJFLr3为引物进行PCR扩增， 获得 PCR产物； [0015]三、 对PCR产物进行电泳检测， 电泳结果出现582bp条带的对应样本为雄性， 无扩增说　明　书 1/4 页 3 CN 114717302 B 3