(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210362001.5 (22)申请日 2022.04.07 (71)申请人 领航基因科技 （杭州） 有限公司 地址 310000 浙江省杭州市萧 山区南阳街 道横蓬园区红山工业区 (72)发明人 夏江　高学娟　 (74)专利代理 机构 杭州汇和信专利代理有限公 司 33475 专利代理师 薛文玲 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12R 1/645(2006.01) C12R 1/66(2006.01) (54)发明名称 尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引物 探针及其应用 (57)摘要 本发明提供一种尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引物探针及其应用， 提供了针对检测 尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引物探针， 且这些引物探针针对尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的ITS的特异性区域设计， 可结合数字 PCR技术快速实现尖端 赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢 曲霉的快速 检测。 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 CN 114908084 A 2022.08.16 CN 114908084 A 1.检测尖端赛多孢子菌的引物探针， 其特征在于， 包括： SEQ  ID NO 1～2所示的核苷酸 序列的引物和SEQ  ID NO:3所示核苷酸序列的探针。 2.根据权利要求1所述的尖端赛多孢子菌的引 物探针， 其特征在于， SEQ  ID NO： 3所示 的探针的5 ’端标记有荧 光报告基团FAM， 3端标记有荧 光淬灭基团MGB。 3.检测土曲霉的引物探针， 其特征在于， 包括： SEQ  ID NO 4～5所示的核苷酸序列的引 物和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针。 4.检测根据权利要求3所述的土曲霉的引物探针， 其特征在于， SEQ  ID NO： 6所示的探 针的5’端标记有荧 光报告基团ROX， 3端标记有荧 光淬灭基团MGB。 5.构巢曲霉的引物探针， 其特征在于， 包括： SEQ  ID NO 7～8所示的核苷酸序列的引物 和SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探针。 6.根据权利要求5所述的构巢曲霉的引物探针， 其特征在于， SEQ  ID NO： 9所示的探针 的5’端标记有荧 光报告基团C Y5‑MGB， 3端标记有荧 光淬灭基团MGB。 7.检测尖端赛多孢子菌、 土曲霉和构巢曲霉的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1到6 中至少两种菌属所述的引物探针。 8.根据权利要求7所述的尖端赛多孢子菌、 土曲霉和构巢曲霉的试剂盒， 其特征在于， 包括检测外源内参的引物和探针； 所述检测外源内参的引物， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO:10～1 1所示； 所述检测外源内参的探针， 核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示。 9.根据权利要求7所述的尖端赛多孢子菌、 土曲霉和构巢曲霉的试剂盒， 其特征在于， 引物探针 针对尖端赛多孢子 菌、 土曲霉、 构巢曲霉 每种菌种的核糖 体基因群的ITS区设计。 10.一种检测尖端赛多孢子菌、 土曲霉和构巢曲霉的方法， 其特征在于， 以待测样品的 DNA为模板， 采用引物组包括如上所述SEQ  ID NO 1～2， SEQ  ID NO 4～5， SEQ  ID NO 7～8， 探针组包括如上所述SEQ  ID NO 3， SEQ ID NO 6， SEQ ID NO 9的引物探针组进行扩增， 若 SEQ ID NO 1～2,SEQ  ID NO 3可以实现对待测样本的DNA的特定性扩增， 则待测样品中含 有尖端赛多孢子菌； 若SEQ  ID NO 4～5,SEQ  ID NO 6可以实现对待测样本的DNA的特定性 扩增， 则待测样品中含有土曲霉； 若SEQ  ID NO 7～8,SEQ  ID NO 9可以实现对待测样本的 DNA的特定性扩增， 则待测样品中含有构巢曲霉。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908084 A 2尖端赛多孢 子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引物探针及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测领域， 特别涉及一种尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引 物探针及其应用。 背景技术 [0002]尖端赛多孢子菌是一种侵袭性和致病性较强的条件致病菌， 在土壤、 污水、 腐物等 受污染的环境中广发存在， 可侵犯人体的多种器官导致多种疾病 形式， 并常引起致死性感 染。 目前临床上诊断尖端赛多孢子菌感染是非常困难的， 因其临床特征和组织病理学与曲 霉病、 镰刀菌病以及其他常见 的透明丝孢霉病非常相似。 目前诊断尖端赛多孢子菌的方式 大多是采用真菌培养的方式， 由于尖端赛多孢子菌在常规的真菌培养基上生长良好， 但是 曲霉菌株不能生长， 以此作为区分尖端赛多孢子菌和曲霉菌的手段， 但真菌培养比较困难 且生长缓慢， 且无法准确地区分曲霉菌株和尖端赛多孢子菌； 还有采用组化 染色、 组织病理 学、 放射学、 血清学以及分子鉴定等多种方式， 其中PCR检测为代表的分子鉴定可以快速准 确地检测到尖端赛多孢子菌， 但是考虑到该菌种菌株间的极大可变性， 需要选择一个相对 稳定的区间才能成功检测到和尖端赛多孢子菌相似的基因型， 也就是说目前利用PCR技术 检测尖端赛多孢子菌的技术依旧存在技术瓶颈， 而若是无法检测到尖端赛多孢子菌， 则无 法针对性 地对其进行治疗， 导 致患者治疗效率差 。 [0003]另外， 曲霉菌病也是导致人肺部疾病或损害免疫系统的一种常规疾病。 曲霉菌病 通常由曲霉导致， 目前检测曲霉感染的主要方法为GM检测， 其缺点是受某些食物或药物的 影响可致假阳性结果。 虽然已有通过P CR检测曲霉属的相关技术研究， 但是不同曲霉之间依 旧是有区分的， 目前临床上缺乏对曲霉属下属科的曲霉进行检测的技 术研究。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引 物探针及其 应用， 提供了针对检测尖端赛多孢子菌、 土曲霉、 构巢曲霉的引物探针， 这些引物探针结合 数字PCR技 术快速实现尖端赛多孢子 菌、 土曲霉、 构巢曲霉的快速检测。 [0005]第一方面， 本方案提供了一种尖端赛多孢子菌的引物探针， 包括： SEQ  ID NO 1～2 所示的核苷酸序列的引物和SEQ  ID NO:3所示核苷酸序列的探针。 [0006]其中SEQ ID NO： 1所示的正向引物为： CG GTTGCCTTCTGCGTAGTA A； [0007]SEQ ID NO： 2所示的反向引物为： CGC CGGGACCCAATG； [0008]SEQ ID NO： 3所示的探针为： TCTCT TTTGCAAGCTC。 [0009]针对尖端赛多孢子的保守区域SCE ‑STD设计， 保守区域的长度为： 136bp， 具体序列 为: [0010]CTCGCGACCCCCGTAGGCCCTGAAATACAGTGGCGGTCCCGCCGCGGTTGCCTTCTGCGTAGTA  AGT CTCTTTTGCAAGCTCGCAT TGGGTCCCGGCGGAGGCCTGCCGTCAAACCACCTAACAACTCCAGA TGGTTGACC。 [0011]SEQ ID NO： 3所示的探针的5 ’端标记有荧光报告基团FAM， 3端标记有荧光淬灭基说　明　书 1/9 页 3 CN 114908084 A 3