(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210360130.0 (22)申请日 2022.04.06 (71)申请人 内蒙古农业大 学 地址 010010 内蒙古自治区呼和浩特市赛 罕区昭乌达路3 06号 申请人 金河佑本生物制品有限公司 (72)发明人 王凤雪　温永俊　赵洪哲　康斌　 赵炳武　董鹏　张金龙　武玉梅　 (74)专利代理 机构 北京八月瓜知识产权代理有 限公司 1 1543 专利代理师 袁晓雨 (51)Int.Cl. C07K 14/47(2006.01) C12N 15/66(2006.01) C12N 15/70(2006.01)C12N 15/12(2006.01) C12N 1/21(2006.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61P 37/02(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种细胞免疫调节蛋白及其应用 (57)摘要 本发明涉及基因工程技术领域， 尤其是涉及 一种细胞免疫调节蛋白及其应用， 所述细胞免疫 调节蛋白为pIL ‑18BP‑X2， 且所述pIL ‑18BP‑X2的 氨基酸序列如SEQ  IDNO.1所示。 本发明从猪肺泡 巨噬细胞(PAM)获得的细胞免疫调节蛋白pIL ‑ 18BP‑X2在大肠杆菌表达系统中可实现高效表 达， 并且经NI柱纯化后可得到单一性蛋白； 其是 具有降低猪干扰素伽马(pIFN ‑γ)分泌的小分子 蛋白质， 可显著抑制pIFN ‑γ的mRNA表 达量， 调节 pIFN‑γ的活性的效果， 具有治疗应用潜力。 因 此， 本发明的pIL ‑18BP‑X2蛋白， 丰富了细胞免疫 调节剂， 为临床上调节细胞免疫提供了很好的帮 助。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图2页 CN 114605521 A 2022.06.10 CN 114605521 A 1.一种细胞免疫调节蛋白， 其特征在于， 所述细胞免疫调节蛋白为pIL ‑18BP‑X2， 且所 述pIL‑18BP‑X2的氨基酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.一种细胞免疫调节剂， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的细胞免疫调节蛋白。 3.一种权利要求1所述细胞免疫调节蛋白的应用， 其特征在于， 所述细胞免疫调节蛋白 在制备细胞免疫调节剂中的应用。 4.一种表达权利要求1所述细胞免疫调节蛋白的基因， 其特征在于， 所述基因的碱基序 列如SEQ ID NO.2所示。 5.一种制备权利要求4所述基因 的引物组合物， 其特征在于， 所述引物 组合物包括pIL ‑ 18BP‑X2‑F(EcoRI)和pI L‑18BP‑X2‑R(XhoI)； 优选地， 所述pIL ‑18BP‑X2‑F(EcoRI)的序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述pIL ‑18BP‑X2‑R (XhoI)的序列如SEQ  ID NO.4所示。 6.一种重组表达载体， 其特 征在于， 包括权利要求 4所述的基因。 7.一种权利要求6所述重组表达载体的制备方法， 其特征在于， 将所述基因插入到表达 载体的限制性酶切位 点之间， 所述表达载体为pET ‑28a。 8.根据权利要求7所述的制备方法， 其特征在于， 所述限制性酶切位点为pET ‑28a上的 EcoRI和Xho I。 9.一种重组工程菌株， 其特征在于， 将权利要求6所述的重组表达载体转化宿主细胞， 得到重组工程菌株。 10.一种权利要求1所述细胞免疫调节蛋白的制备方法， 其特征在于， 使用权利要求9所 述的重组工程菌株制备。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114605521 A 2一种细胞免疫调节蛋白及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及基因工程 技术领域， 尤其是 涉及一种细胞免疫调节蛋白及其应用。 背景技术 [0002]细胞免疫是把双刃剑， 免疫太弱会使机体更容易感染病原微生物， 而免疫太强会 导致免疫细胞疯狂地攻击发炎部位周边的细胞、 组织、 器官， 引起免疫过激反应， 造成对自 身的损害， 从而引发 “细胞因子风 暴”。 [0003]研究发现， IL ‑18mRNA在多种 细胞(单核细胞、 血管平滑肌细胞及内皮细胞等)中表 达， 并在含有这些细胞的器官及组织(肝、 肾、 骨骼肌等)中可检测到IL ‑18mRNA的表达。 IL ‑ 18具有多种有效的生物学功能， 可通过诱导T细胞及自然杀伤细胞产生IFN ‑γ的作用， 在抗 感染、 免疫调节、 抗肿瘤 及慢性炎性疾病的发生发展中扮演着重要角色。 [0004]目前， 在发生结肠炎的患者中， 干扰素 ‑γ可以促进炎症并加剧肠道内的炎症反 应， 从而加重沙门氏菌引起的结肠炎， 细胞免疫 可以加重疾病的严重程度， 此时应用本发明 提供的蛋白可降低干扰素 ‑γ的分泌， 降低炎症反应。 研究表明， IL ‑18与重组IL ‑18bp结合 可通过干预关键 炎症相关通路和杀伤细胞凋亡保护小鼠肝脏免受炎症损伤。 [0005]根据人类疾病发展与IL ‑18BP的关系研究， 具有调节免疫作用的IL ‑18BP在猪的疾 病康复过程中也具有良好应用前 景， 目前国内外对猪I L‑18BP的研究尚处于空白。 [0006]本发明提供的细胞免疫调节蛋白(pIL ‑18BP‑X2)是通过基因工程方法从猪肺泡巨 噬细胞(PAM)获得， 其具有降低猪干扰素伽马(pIFN ‑γ)分泌的作用。 该蛋白能高亲和力与 IL‑18结合并抑制IL ‑18相关的生物学活性,从而降低其所参与的炎性反应， 丰富了细胞免 疫调节剂。 并且， 本发明提供的细胞免疫调节蛋白可在大肠杆菌大量表达制备便 于纯化。 发明内容 [0007]本发明的目的在于提供一种新型的细胞免疫调节蛋白， 丰富了细胞免疫调节剂， 为临床上调节细胞免疫提供了帮助。 [0008]根据本发明实施例的第一方面， 提供一种细胞免疫调节蛋白， 所述细胞免疫调节 蛋白为pI L‑18BP‑X2， 且所述pI L‑18BP‑X2的氨基酸序列如SEQ  IDNO.1所示。 [0009]本发明的细胞免疫调节蛋白pIL ‑18BP‑X2， 全长190个氨基酸， 理论分子量为 21kDa， 经证实， 本发明的细胞免疫调节蛋白与已证明的细胞免疫调节蛋白同源性低， 其为 一种新型的可开发利用的免疫调节蛋白， 丰富了细胞免疫调节剂。 [0010]根据本发明实施例的第二方面， 提供一种细胞免疫调节剂， 包括上述的细胞免疫 调节蛋白， 也理应属于 本发明的保护范围。 [0011]根据本发明实施例的第三方面， 提供一种上述细胞免疫调节蛋白的应用， 所述细 胞免疫调节蛋白在制备细胞免疫调节剂中的应用， 也理应属于 本发明的保护范围。 [0012]根据本发明实施例的第四方面， 提供一种表达细胞免疫调节蛋白的基因， 所述基 因的碱基序列如SEQ  IDNO.2所示。说　明　书 1/4 页 3 CN 114605521 A 3