(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210340564.4 (22)申请日 2022.04.02 (66)本国优先权数据 202111651115.3 2021.12.3 0 CN (71)申请人 中国农业科 学院棉花研究所 地址 455000 河南省安阳市黄河大道38号 (72)发明人 王鹏　李付广　葛晓阳　秦文强　 王晔　杨召恩　曾小林　 (74)专利代理 机构 咸宁鸿信专利代理事务所 (普通合伙) 42249 专利代理师 叶厚朴 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) (54)发明名称 一种用于检测棉花中17L397-1的核酸序列 及其检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种用于检测棉花中17L397 ‑1 的核酸序列及其检测方法， 所述棉花中17L397 ‑1 的核酸序列包括SEQ  ID NO:1所示序列或其 反向 互补序列、 或者SEQ  ID NO:2所示序列或其反向 互补序列。 本发明棉花中17L397 ‑1具有产量性状 改良和耐草甘膦除草剂的特性， 且检测方法可以 准确快速地鉴定生物样品中是否包含转基因棉 花事件中17L397 ‑1的DNA分子 。 权利要求书1页 说明书16页 序列表5页 附图5页 CN 114525277 A 2022.05.24 CN 114525277 A 1.一种核酸分子， 其特 征在于， 包括如下任意 一种： i)包含SEQ ID NO:1和/或SEQ  ID NO:2所示序列， 或其反向互补序列； ii)包含SEQ ID NO:3和/或SEQ  ID NO:4所示序列， 或其反向互补序列； iii)包含SEQ ID NO:6和/或SEQ  ID NO:7所示序列， 或其反向互补序列； iv)包含SEQ ID NO:5所示序列， 或其反向互补序列。 2.用于检测棉花转化事件的探针， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO:1或SEQ  ID NO:2或SEQ   ID NO:3或SEQ  ID NO:4或SEQ  ID NO:6或SEQ  ID NO:7所示序列或其片段或其变体或其反 向互补序列。 3.用于检测棉花转化事件的引物对， 其特征在于， 所述引物对的扩增产物包含权利要 求2所述的序列； 任选地， 所述引物对为SEQ  ID NO:8和SEQ  ID NO:9所示的序列； 或者SEQ  ID NO:10和 SEQ ID NO:11所示的序列。 4.用于检测棉 花转化事件的试剂 盒或微阵列， 其特征在于， 包含权利要求2所述的探针 和/或权利要求3所述的引物对。 5.检测棉花转化事件的方法， 其特征在于， 包括利用以下任一项来检测待测样品中是 否存在所述 转化事件： i)权利要求2所述的探针； ii)权利要求3所述的引物对； iii)权利要求2所述的探针和权利要求3所述的引物对； iv)权利要求 4所述的试剂盒 或微阵列。 6.对棉花进行育种的方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 1)获得包 含权利要求1所述核酸分子的棉花； 2)将步骤1)所获得的棉花通过花粉培养、 未受精胚培养、 加倍培养、 细胞培养、 组织培 养、 自交或杂交或以上的组合得到棉花植物、 种子、 植物细胞、 后代 植物或植物部 分； 以及任 选地， 3)对步骤2)所获得的后代植物进行产量性状的评估和/或除草剂的抗性鉴定， 并利用 权利要求5所述的方法来检测其中是否存在所述 转化事件。 7.由权利要求6的方法获得的棉花植物、 种子、 植物细胞、 后代植物或植物部分制成的 制品， 包括食品、 饲料或工业原料。 8.一种保护棉花植物免受由除草剂引起的损伤的方法， 其特征在于， 包括将含有有效 剂量草甘膦除草剂施加到种植至少一种转基因棉花植物的大田中， 所述转基因棉花植物在 其基因组 中依次包含SEQ  ID NO:1、 SEQ ID NO:5第178 ‑3842位核 酸序列和SEQ  ID NO:2， 或 者所述转基因棉花植物的基因组中包含SEQ  ID NO:5； 所述转基因棉花植物具有对草甘膦 除草剂的耐受性。 9.一种棉花植物产量性状改良的方法， 其特征在于， 包括种植至少一种转基因棉花植 物， 所述转基因棉 花植物在其基因组中依次包含SEQ  ID NO:1、 SEQ ID NO:5第178 ‑3842位 核酸序列和SEQ  ID NO:2， 或者所述转基因棉花植物的基因组中包含SEQ  ID NO:5； 所述转 基因棉花 植物具有明显且稳定改良的产量 性状。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114525277 A 2一种用于 检测棉花中17L397 ‑1的核酸序列及其检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及植物生物技术领域。 具体的说， 涉及一种用于检测棉花中17L397 ‑1的 核酸序列及其检测方法， 特别是涉及一种产量性状改良和耐受草甘膦除草剂施用的转基因 棉花事件中17L397 ‑1和用于检测生物样品中是否包含特定转基因棉花事件中17L397 ‑1的 核酸序列及其检测方法。 背景技术 [0002]棉花是世界上最重要的天然纤维作物， 也是蛋白、 油脂的重要来源。 全球棉花种植 面积约为4.9亿亩， 产值超过500亿美元。 中国、 印度、 美国等五国占总产的70％以上。 其中 美、 澳等先进植棉国家， 由于实现了全程机械化， 其棉花产业具有极强的国际竞争力， 引领 着棉花产业的发展方向。 [0003]我国是棉花生产大国， 全 国约有1亿棉农， 年种植棉花面积约6000～8000万亩， 年 产原棉450～560万吨， 占世界产棉总量的25％左右。 同时中国是世界最大的棉花进口国家， 未来几年中 国棉花进口预期继续猛增， 中 国官方媒体报告， 近几年， 中 国每年棉花进口将猛 增至大约700万 公吨。 原因是中 国纺织和服装工业在蓬勃发展。 因此通过生物 技术提高我国 棉花的产量， 将对棉花种植 业、 棉纺业的发展起到极大的影响。 [0004]FCA和ABA脱落酸有高亲和性， 立体专一性， 而且符合受体动力学原理。 ABA的结合 直接控制了FCA介导的mRNA前体的加工， FCA是一个参与了RNA代谢的ABA受体。 研究发现： 将 控制FCA基因的RRM2结构域和耐除草剂基因g10 ‑epsps转到受体中， 得到的转化体均表现出 品质性状改良和除草剂抗性等方面的明显改变， 因此认为该方法可广泛应用于双子叶和单 子叶作物的经济性状的改良。 [0005]田间杂草与作物竞争水、 肥、 光及生长空间， 直接影响农作物产量与质量。 同时许 多杂草又是作物病原菌及害虫 的中间寄主， 是作物增产的重要生物限制因子之一。 据联合 国粮食与农业组织统计， 全球因杂草导致的粮食生产损失每年高达950亿美元， 相当于损失 了3.8亿吨小麦， 约合2009年全球小麦产量的半数以上。 在950亿美元的经济损失 中， 贫困的 发展中国家承受了大约700亿美元(FAO.The  lurking menace of weeds[J/OL].(http:// www.fao.org/new s/story/ en/item/29402/icode/)， 2009 ‑08‑11.)。 因此， 有效地控制田间 杂草是促进粮食增产的重要措施之一。 随着我国农村人 口往城市迁移速度的加快， 玉米种 植的规模化和机械化是一个可预见的趋势， 这使得传统的人工除草方式变得不现实。 当前， 市场上广泛应用的选择性除草剂施用量大， 残留期 长、 容易影响下茬作 物的正常生长。 草铵 膦等灭生性除草剂具有高效、 低毒、 易降解、 无残留等特点。 但它们除草没有选择性， 不能直 接用在作物的生长期。 通过转基因技术培育耐该类灭生性除草剂的棉花可以克服这一难 题。 在棉花生长期喷施1 ‑2次就能有效解决杂草问题， 减少了除草剂的用量及投入成本。 因 此， 耐除草剂转基因棉花具有非常广阔的应用价 值和市场潜力。 [0006]已知外源基因在植物体内的表达受到它们的染色体位置的影响， 可能是由于染色 质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。 为此， 通常需要筛选大量说　明　书 1/16 页 3 CN 114525277 A 3