ICS 65.020.01 B 000 45 5 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 CCS DBB45/T 240 02—2021 陆生生野生 生动物物疫病 病采样 样技术术规范 范 Techhnical sppecificat tion for samplin ng of terrestriaal wildli ife-bornee infeectious diseases s 2021 - 11 - 27 发布 发 广西壮 壮族自治区 区市场监督 督管理局 2021 - 12 1 - 25 实施 实 发 布 目 次 DB45/T 2402—2021 前言 ................................................................................. II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 采样要求 ........................................................................... 1 5 采样设备 ........................................................................... 2 6 采样 ............................................................................... 2 7 样品标记和采样记录 ................................................................. 5 8 样品保存 ........................................................................... 6 9 废弃物的处置 ....................................................................... 6 10 安全操作要求 ...................................................................... 6 附录 A（资料性） 陆生野生动物疫病样品采集工作用表 ..................................... 8 I 前 言 — DB45/T 2402 2021 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由广西壮族自治区林业局提出、归口并宣贯。 本文件起草单位：南宁市动物园、广西壮族自治区陆生野生动物救护研究与疫源疫病监测中心。 本文件主要起草人：吴俊仪、陈月妃、阙腾程、雷伟、黄宁、杨露、陈盘余、吴媛琼、何梅红、 农汝、冯华娟、陆兵兵、曹佳媛、黎寿生。 II DB45/T 2402—2021 陆生野生动物疫病采样技术规范 1 范围 本文件规定了陆生野生动物疫病采样技术的术语和定义、采样要求、采样设备、采样、样品标记和 采样记录、样品保存、废弃物的处置、安全操作要求。 本文件适用于广西区内陆生野生动物疫病样品的采集。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 LY/T 1959 陆生野生动物疫源疫病监测技术规范 农业农村局农医发〔2005〕25号 病死和死因不明动物处置办法（试行） 农业农村局农医发〔2017〕25号 病死动物无害化处理技术规范 3 术语和定义 3.1 LY/T 1959界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 陆生野生动物 terrestrial wildlife 依靠陆地、水面进行生存、繁衍的野生动物，包括哺乳类、鸟类、爬行类、大部分两栖类和部分无 脊椎动物。本文件特指哺乳类、鸟类、爬行类和两栖类动物。 3.2 陆生野生动物疫病 terrestrial wild-borne infectious diseases 在陆生野生动物之间自然传播、流行，对野生动物种群构成威胁或可能传染给人类和饲养动物的传 染病。 4 采样要求 4.1 审批要求 采集疫病样品，应报告和获得审批，采样程序应符合有关法律法规的要求。 4.2 强度要求 采样动物数量参照 LY/T 1959 的规定。 应采集病变特征明显的组织，相同的样品不少于 2 份。 50 m 内分点采集土壤 5 份，每份 20 g～50 g；100 m 内分点采集中层水 5 份，每份 500 mL。 空气流通不良的饲养环境可采集空气样品，用平板暴露法采集空气，采样高度距离地面 80 cm～ 150 cm，对角线分点放置 4～5 份营养琼脂培养基，暴露 5 min。 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4 1 — DB45/T 2402 2021 4.3 时间要求 4.3.1 4.3.2 陆生野生动物死亡后，应立即采集样品，夏季不应超过 6 h，冬季不应超过 24 h。 用于免疫效果评价的样品，应在免疫后 21 d 采集。 4.4 其他要求 4.4.1 4.4.2 4.4.3 4.4.4 怀疑患有炭疽等不宜解剖的陆生野生动物，应由具有资质的单位或部门进行采样。 采样人员应经过专业技术培训，熟悉采样器具的使用，掌握正确的采样方法。 采样人员应做好个人防护。 所有容器和采集器械应经过消毒且完整无缺，避免样品的交叉污染。 5 采样设备 5.1 保定器械 麻醉吹管、麻醉针等。 5.2 采样器械 离心机、镊子、手术剪、酒精灯、酒精棉、碘酊棉、注射器、一次性采血针、血液生化管、T形管、 U形管、不同型号的密封袋、灭菌棉签、保存液等。 5.3 解剖器械 解剖剪、手术刀柄和刀片、止血钳、解剖刀、钢锯、骨剪、尺子、酒精灯、接种环、病理组织存放 瓶、细菌培养基、组织固定液等。 5.4 防护物品 一次性口罩、N 95口罩、一次性帽套、一次性连体防护服、一次性乳胶手套、胶鞋、一次性隔离衣、 一次性防水鞋套、免洗消毒液、护目镜等。 5.5 记录材料 记号笔、采样单、标签纸、记录本等。 5.6 其他物品 样品保存箱、试管架、胶布、封口膜、封条、冰袋、医疗废物袋等。 6 采样 6.1 体液样品 6.1.1 血液样品 6.1.1.1 采血部位 2 DB45/T 2402—2021 陆生哺乳动物可选择动脉、静脉采血；鸟类动物可选动脉、静脉和心脏采血；啮齿动物可从尾尖采 血或是眼窝内的血管丛采血；爬行动物可从尾静脉采血；两栖动物可从心脏采血。 6.1.1.2 采血方法 对采血部位进行清理消毒，待干燥后进行采血，将血液滴到或抽入试管内。鸟类等少量血清样品的 采集，可用塑料T形管采集。 6.1.1.3 血液处理 6.1.1.3.1 全血 进行血液学分析，细菌、病毒或原虫培养，用全血样品。所采集的血液应装入抗凝管，摇匀，低温 保存备用。血液寄生虫样品应采集末梢血液直接涂片固定备用。 6.1.1.3.2 血清 分离血清的样品不加抗凝剂，采集的血液应在室温下静置，待血清析出后，收集备用；或进行离心 分离。 6.1.1.3.3 血浆 所采集的血液应装入抗凝管，摇匀，离心抽取上清液。 6.1.2 胃液 6.1.2.1 活体动物 可安全保定的野生动物，将胃管插入胃内用注射器抽取；或是将胃管外端连接在吸引器的负压瓶上， 加压后，取胃液。 6.1.2.2 死亡动物 解剖后直接提取胃液。 6.1.3 胆汁、脓液、粘液或关节液 经烫烙等方法消毒后，抽取所需样品，密封待用。 6.1.4 乳汁 应将乳房洗净消毒，去除最初的乳汁后，采集适量乳汁置于灭菌器具中。进行血清学检验的乳汁不 应冻结、加热或强烈震动。 6.1.5 精液 活体动物可用假阴道法、电刺激法等人工方法采集；死体则消毒后从睾丸直接抽取。 6.2 组织样品 6.2.1 皮肤及附属组织 3 — 宜采集病变的皮肤包括痂皮、未破裂水泡的水泡液、水泡皮、羽毛用消毒的器械直接采取皮肤及皮 肤附属组织，放入经消毒过的保存容器中。 DB45/T 2402 2021 6.2.2 肌肉及实质器官 切开皮肤，无菌取肌肉和器官，密封低温保存。剖开腹腔时，不要损坏肠道。 6.2.3 胃肠道 选择病变最明显的胃肠道部分，灭菌生理盐水冲洗弃去内容物，剪取胃肠道组织密封低温保存。 6.2.4 脑、脊髓 较小的动物，取整个头部，无菌纱布包裹并密封待用；较大的动物，可开颅无菌取样，置于保存液 中备用。 6.3 内容物 6.3.1 肠内容物 烧烙肠壁表面，抽取肠内容物置于保存液中；或结扎肠管两端，从两端剪断密封低温保存。 6.3.2 胃内容物 可安全保定的反刍动物，可从口腔采集反刍的食团。其他动物可插入胃管抽取胃液。 6.4 拭子及镜检样品 6.4.1 呼吸道拭子 将灭菌棉拭子插入鼻腔、咽喉或气管内，轻轻旋转3圈粘取分泌物，将样品端剪下，放入保存液中， 密封。 6.4.2 肛门或泄殖腔拭子 将灭菌棉拭子插入肛门或泄殖腔内1 cm左右，轻轻旋转3圈粘取分泌物，将样品端剪下，放入保存 液中，密封。 6.4.3 生殖道拭子 将灭菌棉拭子粘取生殖道、阴道分泌物或包皮冲洗液，将样品端剪下，放入保存液中，密封。 6.4.4 眼睛拭子 将灭菌棉拭子轻轻擦拭眼结膜表面后，将样品端剪下，放入保存液中，密封。 6.4.5 物体表面拭子 物体面积＜100 cm ，应取全部物体表面；物体面积≥100 cm ，则取100 cm 。用5 cm×5 cm的标准灭 菌规格板，放在被检物体表面，用浸有生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦 5 次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板。门把手等不规则物体表面用灭菌棉拭子直接涂擦采样， 放入保存液中，密封。 2 6.4.6 培养样品 4 2 2 用灭菌接