(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211122796.9 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 武汉轻工大 学 地址 430023 湖北省武汉市东西湖区常青 花园学府南路68号 (72)发明人 方敏　徐婷　曾庆儒　王赵劼　 柳鑫　宫智勇　 (74)专利代理 机构 武汉楚天专利事务所 421 13 专利代理师 杨宣仙 (51)Int.Cl. G01N 21/64(2006.01) G01N 1/28(2006.01) (54)发明名称 一种基于荧光分析和邻苯二酚的3-MCPD检 测方法 (57)摘要 本发明提供了一种基于荧光分析和邻苯二 酚的3‑MCPD检测方法。 该方法首先针对不同浓度 的3‑MCPD标准溶液分别加入邻苯二酚溶液和聚 乙烯亚胺溶液， 调节pH值至8～9， 然后置于55～ 65℃温度条件下反应待其溶液出现浅黄色， 并使 用荧光分光光度计进行检测， 检测的吸光度值和 3‑MCPD的浓度进行线性拟合， 得到标准曲线方 程； 针对待检测样品采用同样的方式处理后采用 荧光分光光度计进行检测， 并将检测的吸光度值 带入方程中算出3 ‑MCPD的浓度。 本发明利用邻苯 二酚在聚乙烯 亚胺碱性环境下形成邻醌类物质， 然后加入3 ‑MCPD使其对邻醌类物质有猝灭 效果， 基于3‑MCPD猝灭的邻醌类荧光信号， 建立了一种 简单、 有效、 方便、 无毒、 环保、 高灵 敏度的3‑MCPD 检测方法， 通过试验证明其检测结果 准确。 权利要求书2页 说明书6页 附图3页 CN 115326774 A 2022.11.11 CN 115326774 A 1.一种基于荧 光分析和邻苯二 酚的3‑MCPD检测方法， 其特 征在于具体步骤如下： (1)邻苯二 酚溶液制备： 将固体邻苯二 酚溶解于超纯 水中， 制成邻苯二 酚溶液； (2)聚乙烯亚胺溶 液制备： 将聚乙烯亚胺标准品溶于超纯 水中， 制成聚乙烯亚胺溶 液； (3)制作3 ‑MCPD浓度c与荧 光强度T的标准曲线方程： a.配制不同浓度的3 ‑MCPD标准溶液； b.针对不同浓度的3 ‑MCPD标准溶液分别加入步骤(2)中配制的邻苯二酚溶液， 并加入 步骤(3)中配制的聚乙烯亚胺溶液调节pH值至8～9， 每个浓度的3 ‑MCPD标准溶液中邻苯二 酚的质量浓度为0.0 5～0.08mg/mL； c.将步骤b中加入邻苯二酚的3 ‑MCPD标准溶液置于55～65℃温度条件下反应10～ 15min待其溶液出现浅黄色， 停止加热， 随后将其冷却至室温， 并使用荧光分光光度计进行 检测， 测得不同浓度3 ‑MCPD标准溶液的对应的吸光度值； d.将测得的标准溶液对应的吸光度值和3 ‑MCPD的浓度进行线性拟合， 得到吸光度值T 与3‑MCPD浓度c对应关系的标准曲线方程； (4)将待检测样品置于容器中， 重复步骤(3)的步骤b加入邻苯二酚溶液和聚乙烯亚胺 溶液配制成检测溶液， 然后重复步骤(3)的步骤c进 行加热反应后， 冷却至室温， 使用荧光分 光光度计进 行检测得到检测溶液的吸光度值T， 并将 检测的吸光度值T代入步骤(3)的步骤d 中的标准曲线方程式 中计算出待检测样品中3 ‑MCPD的浓度。 2.根据权利要求1所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征在 于： 所述步骤(3)中配制6个3 ‑MCPD标准溶液， 其浓度分别为0、 0.08、 0.2、 0.4、 0.8、 2mg ·L‑ 1； 荧光分光光度计激发光谱的波长为370nm， 检测6个3 ‑MCPD标准溶液在发射光谱波长为 480nm处的荧光强度， 6个3 ‑MCPD标准溶液对应的吸光度分别为3413、 3011、 2713、 2455、 2032、 449.9， 将测得的标准溶液对应的吸光度值和3 ‑MCPD的浓度进行线性拟合， 得到吸光 度值T与3 ‑MCPD浓度c对应关系的标准曲线方程式为： T＝ ‑1369.2c+3139.8。 3.根据权利 要求1或2所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征 在于： 所述 步骤(4)待检测样品为棕榈油、 酱油或自来水。 4.根据权利 要求1或2所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征 在于： 所述步骤(3)的步骤b中加入步骤(3)中配制的聚乙烯 亚胺溶液调节pH值至8.5； 步骤c 中将加入邻苯二酚的3 ‑MCPD标准溶液置于60℃砂浴中反应10min待其溶液出现浅黄色， 停 止加热， 随后将其置 于冰浴冷却至室温。 5.根据权利 要求1或2所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征 在于： 所述 步骤(1)中的邻苯二 酚溶液的浓度为 4～8mg/mL。 6.根据权利 要求1或2所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征 在于： 所述 步骤(2)中的聚乙烯亚胺溶 液的浓度为5～6mg/mL。 7.根据权利要求3所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征在 于： 所述待检测样品为棕榈油时， 在进行检测前对棕榈油进行 前处理， 其处理过程如下： (1)将棕榈油按照质量体积比0.1g:0.5ml溶于异辛烷中， 然后入H2SO4与正丙醇混合溶 液， 漩涡混匀后在45℃水浴下超声15min， 随后加入浓度为0.5mol/L甲醇钠溶液快速水解 3min， 水解完成后迅速加入正庚烷和浓度3.3％的冰醋酸溶液终止反应； 其中， 所述H2SO4和 正丙醇的混合体积比为0.5％； 浓度3.3％的冰醋酸溶液是将冰醋酸溶解于浓度为0.01g/mL  权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115326774 A 2NaCl溶液中配制而成的冰醋酸溶液； 所述棕榈油与浓度为0.5mol/L甲醇钠的质量体积比为 0.1g:1ml； 所述棕榈油与正庚烷的质量体积比为0.1 g:3ml； 所述棕榈油与浓度3.3％的冰醋 酸的质量体积比为0.1g:3ml。 (2)在步骤(1)中充分反应后除去上层有机相， 用正庚烷萃取两次， 除去溶液中残留的 非极性成分， 取下层水相即为棕榈油的样品检测溶液； 每次萃取时棕榈油与正庚烷的质量 体积比为0.1g:3ml。 8.根据权利要求3所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征在 于所述待检测样品为酱油时， 在 进行检测前对酱油进 行前处理， 其处理过程如下： 将成品酱 油按照质量体积比2g:3ml的比例加 入浓度5mol/L的NaCl溶液混合， 上样固相萃取柱， 先用 己烷‑乙醚混合溶液洗脱， 然后改用乙醚洗脱， 收集乙醚洗脱液并脱除溶剂， 加水于离心管 中振荡均匀即为酱油的样品检测溶液； 其中所述己烷 ‑乙醚混合溶液是按照体积比9:1的比 例混合配制 而成； 酱油与己烷 ‑乙醚混合溶液的质量体积比为1g:10ml； 酱油与乙醚质量体 积比为2g:75ml； 酱油与水的质量体积比为1g:0.25ml。 9.根据权利要求3所述的一种基于荧光分析和邻苯二酚的3 ‑MCPD检测方法， 其特征在 于： 所述待检测样品为自来水时， 在 进行检测前对自来水样品高速离心， 上清液用0.45um滤 膜过滤即得到自来水的样品检测溶 液。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115326774 A 3