(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211306194.9 (22)申请日 2022.10.25 (71)申请人 华夏源 （上海） 生命科技有限公司 地址 200120 上海市浦东 新区叠桥路45 6弄 181-182号 一层112室 (72)发明人 朱灏　 (74)专利代理 机构 上海诺名知识产权代理事务 所(普通合伙) 3145 6 专利代理师 韩后良 (51)Int.Cl. G01N 15/14(2006.01) G01N 1/28(2006.01) G01N 1/30(2006.01) (54)发明名称 一种脂肪干细胞细胞周期的检测方法 (57)摘要 本发明涉及细胞检测相关技术领域， 更具体 地， 本发明提供了一种脂肪干细胞细胞周期的检 测方法， 包括细胞接种； 所述细胞接种是取复苏 的细胞， 接种于培养瓶中， 融合， 收集细胞， 洗涤， 离心， 去上清， 得接种细胞； 所述培养瓶中的培养 基包括基础培 养基和助剂。 权利要求书1页 说明书8页 CN 115372233 A 2022.11.22 CN 115372233 A 1.一种脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 包括细胞接种， 其特征在于， 所述细胞接种是 取复苏的细胞， 接种于培养瓶中， 融合， 收集细胞， 洗涤， 离心， 去上清， 得接种细胞； 所述培 养瓶中的培养基包括基础培养基和助剂； 所述助剂包括转铁蛋白、 血清白蛋白、 β ‑巯基乙 醇、 C‑藻蓝素、 β ‑蜕皮甾酮、 茶多酚； 所述转铁蛋白的浓度为25~35 μg/mL、 血清白蛋白的浓度 为1~2.4mg/mL、 β‑巯基乙醇的浓度为4~8 μg/mL、 C ‑藻蓝素的浓度为2.1~2.6 μg/mL、 β ‑蜕皮甾 酮的浓度为14~16 μg/mL、 茶多酚的浓度为10~14 μg/mL。 2.根据权利要求1所述脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 其特征在于， 所述基础培养基 选自DMEM、 M199、 UltraMEM、 HBSS、 F12、 BM E、 RPMI1640、 M CDB104、 M CDB153中的任一种。 3.根据权利要求1所述脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 其特征在于， 所述脂肪干细胞 接种的密度为5 500~6500个/cm2。 4.根据权利要求3所述脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 其特征在于， 所述融合是指细 胞的融合度达75~85%。 5.根据权利要求1所述脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 其特征在于， 所述细胞接种前 包括细胞融解； 所述细胞融解是将冻存的细胞融解后转移到培养基中， 离心洗去冻存液， 沉 淀， 用培养基重悬计数， 得复苏细胞。 6.根据权利要求5所述脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 其特征在于， 所述培养基为 MM3完全培养基。 7.根据权利要求1所述脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 其特征在于， 所述细胞接种后 包括细胞固定、 细胞收集、 酶解、 染色、 流式检测。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115372233 A 2一种脂肪干细胞细胞周期的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及细胞检测相关技术领域， 更具体地， 本发明提供了一种脂肪干细胞细 胞周期的检测方法。 背景技术 [0002]干细胞(stem  cells， SC)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞， 在一定条件下， 它可以分化成多种功能细胞。 胚胎、 婴儿或成人都具有持久或终身自我更新能力的干细胞， 具有产生特异的细胞类型、 形成人体组织和器官 的潜能。 而对于细胞周期的检测有利于干 细胞的多方面应用。 [0003]目前关于细胞的周期检测方面也有一些研究， 比如CN107219196A公开了一种 细胞 周期的检测方法， 其是基于光散射测量的思路展开的， 来判断病毒细胞的生理周期， 从而实 现疾病较好的治疗； 而CN108866146A公开了一种细胞周期的检测试剂盒， 通过流式细胞技 术实现不同阶段的细胞分离 。 [0004]然而人脂肪间充质干细胞的细胞周期检测方法目前没有高效简便的测试方法， 并 且其在分离培养组织干细胞的培养基中易出现增殖 活性损伤以及老化， 为提高脂肪干细胞 细胞周期检测的准确性， 其培 养基的选择 尤为关键 。 发明内容 [0005]为解决上述技术问题， 本发明提供了一种脂肪干细胞细胞周期的检测方法， 包括 细胞接种； 所述细胞接种是取复苏的细胞， 接种于培养瓶中， 融合， 收集细胞， 洗涤， 离心， 去 上清， 得接种细胞； 所述培 养瓶中的培 养基包括基础培 养基和助剂。 [0006]在一种实施方式中， 所述基础培养基选自DMEM、 M199、 UltraMEM、 HBSS、 F12、 BME、 RPMI1640、 M CDB104、 M CDB153中的任一种。 [0007]在一种优选的实施方式 中， 所述基础培 养基选自DM EM、 UltraMEM、 F12中的任一种。 [0008]在一种优选的实施方式 中， 所述基础培 养基为DM EM。 [0009]所述DMEM是dulbecco's  modified  eagle medium的缩写， 所以其特点主要包括以 下： （1） 氨基酸含量为依格尔培养基的2 倍， 且含有非必需氨基酸， 如甘氨 酸等； （2） 维生素含 量为依格尔培养基的4倍； （3） 含有糖酵解途径中的重要物质 ‑‑丙酮酸； （4） 含有微量的铁离 子。 [0010]所述DMEM基础培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基， 可为脂肪干细胞的 新陈代谢提供能量 来源。 [0011]在一种实施方式中， 所述助剂包括转铁蛋白、 血清白蛋白、 β ‑巯基乙醇、 C ‑藻蓝素、 β‑蜕皮甾酮、 茶多酚。 [0012]所述转铁蛋白为脂肪干细胞的增殖培养提供铁源， 是血浆中主要的含铁蛋白质， 转铁蛋白能结合铁 离子， 减少其毒性并被细胞利用。 [0013]所述血清白蛋白能够提供细胞生长所需大量的营养物质， 维持培养基正常的渗透说　明　书 1/8 页 3 CN 115372233 A 3