DB22 吉國林省地方 電标准 DB22/T243-2000 气相色谱-质谱检测霍乱弧菌的方法 Methodological on Verification of Vibrio chlora With Gas chromatography-mass spectrometry 2000-12-30 发布 2001-01-01 实施 吉林省质量技术监督局 发布 DB22/T243-2000 前言 霍乱是由霍乱弧菌所致的一种烈性肠道传染病，通常在霍乱病的流行与发生时 用常规的方法进行霍乱弧菌分离，依据细菌的形态学、生化学、血清学、培养特性 等对其进行鉴定与分型，操作起来比较麻烦，费时、费力。本标准用气相色谱一一质 谱法分析霍乱弧菌全细胞脂肪酸的方法，提出用气相色谱一一质谱分析检测霍乱弧菌 的制谱条件及霍乱弧菌的指纹色谱图。灵敏、样品用量少、省时、省力，能在最短 时间内确定病原，为流行病的防治工作提供科学依据，从而尽快控制疫情，防止疫 病漫延，保障人民健康。 本标准由吉林省卫生厅提出。 本标准由吉林省卫生防疫站负责起草。 本标准主要起草人：宋莉‧·杨修军‧李‧青安笑秋‧王艳华刘洪涛 吉林省地方标准 GB/T243-2000 气相色谱一质谱检测霍乱弧菌的方法 1 范围 本标准规定了气相色谱一一质谱检测霍乱弧菌的检验方法。 本标准适合于气相色谱一质谱对霍乱弧菌的检验。 2 引用标准 下列标准包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示版本 均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 霍乱诊断标准及处理原则； 2. 1GB 15984-1995 3培养基和试剂 3.1甲醇; 3.2甲苯硫酸； 3.3碳酸氢钠；; 3.4正庚烷； 3.5甲醇一甲苯一硫酸溶液（30+15+1); 3.6氢氧化钾一甲醇溶液（0.5mol/L）; 3.7三氟化硼一甲醇溶液（15+85); 3.87 石油醚（60-80）℃; 以上均为分析纯； 3.9庆大琼脂; 3.10碱性陈水； 3.11·霍乱诊断血清。 4仪器 4.1气相色谱质谱联用仪（GC/MS一QP5050A）日本岛津离心机。色谱质谱参考条件：进样 温度270℃程序升温：初始温度50℃，保持2min，以每分钟8℃上升至200℃，保持1min，再以每 分钟5℃上升至250℃保持0.5min，He气流速1.4mm/min，DB一17石英毛细柱，30m×0.25mm。 4.2高速冷冻离心机； 4.3真空冷冻干燥机； 4.4生物显微镜； 4.5恒温水浴箱。 5 操作步骤 5.1冻干菌粉的制备 将霍乱弧菌接种于普通斜面上，培养18—24h，用3ml普通肉汤洗下，合并后加入罗氏瓶中， 37℃培养24h。用无菌生理盐水洗下培养物放入试管中，56℃水浴灭活，经三次分离培养无菌生长， 用盐水洗下培养物离心12000r/min，5min，弃上清液，取沉淀物再用盐水洗，反复三次。离心弃上 清真空冷冻干燥备用，同时做空白试验。 5.2全细胞脂肪酸甲脂化 根据样品量的多少确定甲脂化方法：样品量少时，采用碱甲脂化；样品量多时，采用酸甲脂化。 2001-01-01 实施 吉林省质量技术监督局2000-12-30批准