(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210925615.X (22)申请日 2022.08.03 (71)申请人 南京鼓楼医院 地址 210008 江苏省南京市 鼓楼区中山路 321号 (72)发明人 刘宝瑞　钱小平　 (74)专利代理 机构 南京钟山专利代理有限公司 32252 专利代理师 戴朝荣 (51)Int.Cl. A61K 39/00(2006.01) A61K 39/385(2006.01) A61K 9/51(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61K 47/52(2017.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于蛋白-金属离子的抗原肽纳米疫苗 的构建及作为肿瘤疫苗的应用 (57)摘要 本发明提供一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原 肽纳米疫苗， 所述纳米疫苗是蛋白 ‑金属离子复 合纳米粒子负载抗原肽形成的纳米疫苗； 所述金 属离子是镁离子或锌离子， 镁离子或锌离子分别 来源于氯化镁或氯化锌； 所述蛋白包括人血红蛋 白、 人血清白蛋白、 牛血清白蛋白中的至少一种； 所述抗原包括肿瘤相关抗原和新 抗原。 权利要求书1页 说明书7页 附图7页 CN 115252769 A 2022.11.01 CN 115252769 A 1.一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳米疫苗， 其特征在于， 所述纳米疫苗是蛋白 ‑金 属离子复合纳米粒子负载抗原肽形成的纳米疫苗； 所述金属离 子是镁离 子或锌离 子， 镁离子或锌离 子分别来源于氯化镁或氯化锌； 所述蛋白包括人 血红蛋白、 人 血清白蛋白、 牛 血清白蛋白中的至少一种； 所述抗原包括肿瘤相关抗原和新 抗原。 2.根据权利要求1所述的一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳米疫苗， 其特征在于， 蛋 白与金属离 子的摩尔比为1:6 50。 3.根据权利要求1所述的一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳米疫苗， 其特征在于， 所 述抗原肽与蛋白 ‑金属离子复合纳米粒子通过静电相互作用或化学键连接 。 4.根据权利要求1所述的一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳米疫苗， 其特征在于， 所 述蛋白‑金属离子复合纳米粒子的水和粒径为10 0～200nm。 5.一种如权利要求1～4任一项所述的基于 蛋白‑金属离子的抗原肽纳米疫苗的制备方 法， 其特征在于， 包括以下步骤： S1、 溶解蛋白分子， 在pH值为10～12的碱性条件下通过生物矿化作用使蛋白分子与金 属离子螯合， 反应形成蛋白 ‑金属离子复合纳米粒子； S2、 在水或PBS缓冲液中溶解步骤S1得到的蛋白 ‑金属离子复合纳米粒子和抗原肽， 孵 育后得到纳米疫苗。 6.根据权利要求5所述的制备 方法， 其特 征在于， 步骤S1中， 金属离子的浓度为0.1mol/L， 蛋白分子的浓度为10mg/mL， 蛋白分子表面带 负电荷。 7.根据权利要求5所述的制备 方法， 其特 征在于， 步骤S1中， 所述反应为搅拌反应， 搅拌温度为40～50℃， 搅拌时间为3～5小时， 搅拌速 率为100～1000r/min。 8.根据权利要求5所述的制备 方法， 其特 征在于， 步骤S2中， 抗原肽和蛋白 ‑金属离子复合纳米粒子的质量比为1:0.2 ～1。 9.根据权利要求5所述的制备 方法， 其特 征在于， 步骤S2中， 蛋白 ‑金属离子 复合纳米粒子和抗原肽的孵育温度为25 ‑37℃， 孵育时长为1 ～3小时。 10.如权利要求1～4任一项所述的基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳米疫苗在制备肿瘤 疫苗中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115252769 A 2一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳米疫苗的构建及作 为肿 瘤疫苗的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学及生物工程领域， 具体涉及一种基于蛋白 ‑金属离子 的抗原 肽纳米疫苗的构建及作为肿瘤疫苗的应用。 背景技术 [0002]临床肿瘤治疗过程中， 肿瘤免疫治疗具有特异性强、 副作用小的优点， 是肿瘤治疗 极具发展前景的方式之一。 目前， 已经有包括免疫检查点抑制剂治疗、 过继性细胞免疫治 疗、 癌症疫苗等肿瘤免疫治疗方法。 随着新一代基因测序和生物信息学的发展， 个体识别肿 瘤新抗原成为可能， 个体化新抗原疫苗已开始在小规模早期临床试验中取得良好疗效。 尽 管如此， 肿瘤的个体化新抗原免疫治疗依然面临严峻的挑战， 如新抗原淋巴归巢能力差、 递 呈效率低、 抗原免疫原性弱等。 [0003]近几十年来， 在抗肿瘤免疫治疗领域， 纳 米技术也逐渐成为人们关注的焦点。 利用 纳米载体负载免疫治疗药物， 可以改善药物的溶解性， 提高药物的体内循环 时间。 同时， 纳 米载体及淋巴器官 的结构特点使得纳米粒子更容易集中于淋巴结、 脾脏等免疫器官中。 通 过纳米载体负载新抗原， 能够更加精准的将新抗原 递送到树突状细胞(D C细胞)、 T淋巴细胞 (T细胞)等免疫细胞。 [0004]肿瘤疫苗是在抗原呈递细胞(APCs)的存在下， 通过识别肿瘤抗原刺激体内T细胞 从而诱导持续而强大 的免疫应答以预防和治疗癌症， 是一种极具免疫治疗潜力的新策略。 肿瘤疫苗的活性成分包括递送载体、 肿瘤抗原、 免疫佐剂和制剂四种成分。 因此， 有效提高 抗原的免疫原性和佐剂的激活作用是疫苗研发的两个主 要策略。 [0005]无机佐剂铝、 单磷酰脂质A(MPL)和角鲨烯水包油乳液(MF59)是目前增强疫苗候选 者免疫原性使用最广泛的疫苗佐剂， 但是游离的抗原和佐剂进入人体后， 靶向不同的AP Cs， 导致佐剂不能有效对抗癌细胞， 细胞内抗原的免疫原 性无法有效扩大。 同时， 淋巴结的尺 寸 限制使得疫苗无法精准 递送至免疫细胞或淋巴组织。 [0006]因此， 将抗原和佐剂同时负载在功能性纳米材料中可以获得独特的优势。 迄今为 止， 绝大部 分纳米材料通过共价连接、 静电作用或交联剂等方法载带抗原， 促进免疫细胞对 抗原的摄取。 然 而， 纳米材 料对抗原载 带能力不理想， 难以实际应用。 [0007]综上所述， 急需一种普适的、 靶向淋巴结的， 促进淋巴结高效传递抗原， 激活适应 性和先天免疫反应的肿瘤疫苗。 发明内容 [0008]本发明针对现有技 术中的不足， 提供一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽 纳米疫苗。 [0009]为实现上述目的， 本发明采用以下技 术方案： [0010]一种基于蛋白 ‑金属离子的抗原肽纳 米疫苗， 所述纳 米疫苗是蛋白 ‑金属离子复合 纳米粒子负载抗原肽形成的纳米疫苗；说　明　书 1/7 页 3 CN 115252769 A 3