(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210943390.0 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 上海交通大 学医学院附属仁济医院 地址 200001 上海市黄浦区山 东中路145号 (72)发明人 刘庄　杨宇　刘学良　 (74)专利代理 机构 上海衡方知识产权代理有限 公司 31234 专利代理师 朱穆峰　胡若瑶 (51)Int.Cl. A61K 39/00(2006.01) A61K 47/54(2017.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) A61K 31/7084(2006.01) (54)发明名称 一种多价适配体修饰的装 载有STING激动剂 的肿瘤疫苗及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种多价适配体修饰的装载 有STING激动剂的肿瘤疫苗， 该肿瘤疫苗装载有 STING激动剂， 且修饰有多 价适配体。 该肿瘤疫 苗 的制备方法： 将模型细胞与STING激动剂一起孵 育48h， 得到装载有STING激动剂的模型细胞； 将 线性DNA模板与第一步中得到的装载有STING激 动剂的模型细胞连接1小时； RCA反应缓冲液中扩 增； 超声处理后， 离心后得到多价适配体修饰的 装载有STING激动剂的肿瘤疫苗。 肿瘤疫苗应用 于抗肿瘤免疫治疗。 本发明首次在肿瘤细胞膜表 面进行RCA滚环扩增过程制备肿瘤疫苗； 首次提 前使用STING激动剂激活肿瘤细胞内的STING通 路， 然后提取的肿瘤疫苗可装载STING激动剂可 有效激活抗原递呈细胞； 首次使用GMP ‑DCapt‑TV 作为一种肿瘤疫苗治 疗肿瘤。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 115300617 A 2022.11.08 CN 115300617 A 1.一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗， 其特征在于： 该肿瘤疫苗装 载有STING激动剂， 且修饰有 多价适配体。 2.一种如权利要求1所述的多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制备 方法， 其特 征在于， 该肿瘤疫苗的制备 方法包括以下步骤： 第一步、 将模型细胞与STING激动剂一起孵育48h， 得到装载有STING激动剂的模型细 胞； 第二步、 在室温下， 将线性DNA模板与第一步中得到的装载有STING激动剂的模型细胞 连接1小时， 所述线性DNA模板与多价 适配体的DNA序列互补； 第三步、 将第二 步所得产物放入到RCA反应缓冲液中扩增； 第四步、 将第三步所得产物经过超声处理后， 离心后得到多价适配体修饰的装载有 STING激动剂的肿瘤疫苗。 3.根据权利要求2所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特 征在于： 在第一 步中， 所述模型细胞为B16 ‑OVA细胞。 4.根据权利要求2所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特 征在于： 在第一 步中， 所述STI NG激动剂为C ‑di‑GMP。 5.根据权利要求2所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特征在于： 在第二步中， 所述线性DNA模板的闭环是通过T4  DNA连接酶连接退火 的模板和引物进行的。 6.根据权利要求5所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特征在于： 在第二步中， 所述引物的5'端被标记为胆固醇， 所述引物的3'端标记 为Cy5。 7.根据权利要求2所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特征在于： 在第三步中， 所述RCA反应缓冲液含有DNTP、 phi29  DNA polymerase和 反应缓冲液。 8.根据权利要求2所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特 征在于： 所述扩增是在3 0℃下反应4h 。 9.根据权利要求2所述的一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制 备方法， 其特 征在于： 在第四步中， 所述离心是采用多步密度梯度超速 离心。 10.一种如权利要求1 ‑9中任一权利项所述的多价适配体修饰的装载有STING激动剂的 肿瘤疫苗的应用， 其特 征在于： 该肿瘤疫苗应用于抗肿瘤免疫 治疗。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115300617 A 2一种多价适配体 修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗及其 制备方法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及心肌梗死技术领域， 尤其是一种多价适配体修饰的装载有STING激动 剂的肿瘤疫苗及其制备 方法和用途及其应用。 背景技术 [0002]通过调节患者自身免疫系统来对抗癌症的癌症免疫疗法为临床癌症治疗带来了 巨大希望。 在 免疫疗法中， 激活患者对特定肿瘤抗原的适应性免疫系统以控制肿瘤生长的 癌症疫苗越来越受到关注。 然而， 即使是同一类型 的癌症也可能在患者之间表现出显着的 遗传异质性， 因此只拥有 单一抗原(如肿瘤特异 性蛋白、 肽和脱 氧核糖核酸DNA片段)的常规 癌症疫苗无法诱 导强烈的免疫反应。 [0003]全肿瘤细胞裂解物(WTCL)可以提供全面的患者特异性肿瘤相关抗原(TAA)， 从而 可引发针对广谱肿瘤相关抗原免疫系统的更强免疫力。  WTCL已被用作癌症疫苗开发的肿 瘤抗原。 然而， 肿瘤细胞激活抗原呈递细胞(APC)的能力受到严格控制， 以通过各种机制逃 避免疫监视系统， 从而限制了潜在的基于WTCL的肿瘤疫苗的效能。 因此， 对初始肿瘤细胞进 行修饰以提高其免疫原 性和APCs敏感性有望增强基于WTCL  制备的肿瘤 疫苗的抗肿瘤免疫 效果。 [0004]和本发明最近似的方案是通过胆固醇修饰的单价适配体直接修饰肿瘤细胞膜， 从 而制备肿瘤疫苗。 但是这种方法制备的适配体是单价形式， 和靶标的结合效率很低。 我们的 方法能够细胞表面制备多价态功能性核酸， 这种多价态能够提高对靶标的结合力。 另外， 我 们还在肿瘤 疫苗中装载了STING激动剂， 能够高更好的激活抗原 递呈细胞， 而之前的方案则 没有相关设计。 现有的技术所用的适配体的单价形态对D C细胞的靶向性较低， 影响 效果。 另 外也无法有效激活DC细胞， 限制了抗原递呈过程。 本发明首次在肿 瘤细胞上进行RCA反应， 从而赋予肿瘤 疫苗多价态的功能核酸， 同时使用STING激动 剂激活肿瘤细胞， 使 得随后衍生 的肿瘤疫苗能更好的激活抗原 递呈细胞， 更好的激活体内的免疫系统。 因此， 需要设计一种 多价适配体修饰的装载有STI NG激动剂的肿瘤疫苗及其制备 方法和用途。 发明内容 [0005]为了克服现有技术中的缺陷， 提供一种多价适配体修饰的装载有  STING激动剂的 肿瘤疫苗及其制备 方法和用途。 [0006]本发明通过 下述方案实现： [0007]一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗， 该肿瘤疫苗装载有STING 激动剂， 且修饰有 多价适配体。 [0008]一种多价适配体修饰的装载有STING激动剂的肿瘤疫苗的制备方法， 该肿瘤疫苗 的制备方法包括以下步骤： [0009]第一步、 将模型细胞与STING激动剂一起孵育48h， 得到装载有STING  激动剂的模说　明　书 1/7 页 3 CN 115300617 A 3