(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210842907.7 (22)申请日 2022.07.18 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 2019 957 2019.1 1.20 (71)申请人 贵州大学 地址 550025 贵州省贵阳市花溪区花溪大 道 (72)发明人 康冀川　钱声艳　曾学波　钱一鑫　 卢永仲　陈丽庄　何张江　 (74)专利代理 机构 重庆强大凯创专利代理事务 所(普通合伙) 50217 专利代理师 张显琴 (51)Int.Cl. C07D 273/08(2006.01) C12P 7/6436(2022.01)C12P 17/14(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种对称杂环化 合物、 制备方法及其应用 (57)摘要 本申请涉及微生物技术领域中的一种对称 杂环化合物， 结构如下式所示： 所述化合 物由红棕毛筒腔菌发酵提取后获得， 所述红棕毛 筒腔菌命名为红棕毛筒腔菌Tubeufia  rubra  PF02‑2， 保藏单位： 中国典型培养物保藏中心， 保 藏编号为CCTCC  NO： M 2019957。 该化合物具有制 备肿瘤耐药逆转剂或肿瘤药物增敏剂的用途。 权利要求书2页 说明书11页 附图11页 CN 115043790 A 2022.09.13 CN 115043790 A 1.一种对称杂环化 合物， 其特 征在于： 结构如下式所示： 2.根据权利要求1所述化合物的制备方法， 其特征在于： 所述化合物由红棕毛筒腔菌发 酵提取后获得， 所述红棕毛筒腔菌命名为红棕毛筒腔菌Tubeufia  rubra PF02‑2， 保藏单 位： 中国典型培 养物保藏中心， 保藏编号 为CCTCC NO： M 2019957。 3.根据权利要求2所述化合物的制备方法， 其特征在于： 包括以下步骤： 将红棕毛筒腔 菌Tubeufia  rubra PF02‑2进行液体或固体发酵培养， 得到发酵物； 将发酵物萃取， 所得萃 取物经分离纯化， 得到 长链脂肪酸甘油醇类化 合物。 4.根据权利要求3所述 化合物的制备 方法， 其特 征在于： 具体包括以下步骤： S1、 菌株活化： 取出保存的菌种， 接种在基础培养基平板上， 静置培养传代至第三代后 放大培养； S2、 发酵培养： 取步骤S1活化后的菌种接种在固体培养基中， 在26～30℃下静置发酵培 养一段时间； S3、 萃取： 取菌体连同培 养基， 加入乙酸乙酯萃取， 将萃取 液浓缩后得到发酵产物； S4、 发酵产物预处理： 用氯:甲＝1:1溶剂溶解发酵产物， 再与硅胶按质量比1:1～2混合 均匀， 待溶剂挥发后作为一次上柱样品， 再与硅胶粉和石油醚上分离柱， 分别采用石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯和甲醇依 次梯度洗脱， 洗脱溶剂经旋转蒸发仪减压回收后， 用氯仿、 丙酮或 甲醇溶解， 再用薄层层析点板， 使用展开剂展开， 选择在紫外可见光分析仪下254nm或365nm 有荧光的液体， 再用8％硫酸乙醇香草醛显 色剂显色； 合并甲醇溶剂 洗脱液， 回收甲醇溶剂， 得到甲醇层浸膏； S5、 纯化分离： a、 将甲醇层浸膏用甲醇溶剂溶解， 与硅胶按质量比1:1～3混合均匀， 待 溶剂挥发作上柱样品上预柱， 采用10％甲醇水进 行平衡反相中压柱， 加入含样品预柱， 采用 甲醇水依次10个梯度洗脱， 洗脱液经旋转蒸发仪回收溶剂后， 甲醇溶解后在用薄层层析点 板， 使用展开剂展开， 选择在紫外可见光分析仪下254nm或365nm有荧光的液体， 再合并8％ 硫酸乙醇香 草醛显色剂显 黄绿色的组分， 得到Fr.10组分； b、 将组分Fr.10用甲醇溶剂溶解后， 与硅胶按质量比1:1～3混合均匀， 待溶剂挥 发后作 上柱样品； 采用硅胶粉与乙:甲＝ 150:1溶剂混合均匀装入分离柱中， 加入 上柱样品， 采用采 用乙甲系统150:1、 100:1梯度洗脱， 洗脱液经旋转蒸发仪回收溶剂后， 甲醇溶解后在用薄层 层析点板， 使用展开剂展开， 选择在紫外可见光分析仪下254nm或365nm有荧光的液体， 再合 并8％硫酸乙醇香 草醛显色剂显 黄绿色的组分， 得到Fr.10 ‑4组分； c、 将取Fr.10 ‑4用甲醇溶解， 与硅胶按质量比1:1～3混合均匀， 待溶剂挥 发后作上柱样权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115043790 A 2品， 称取硅胶 粉与氯:甲:甲酸＝200:30:1溶剂混合均匀装入分离柱中， 再加入 上柱样品， 采 用氯:甲:甲酸＝200:30:1等梯度洗脱， 洗脱液用薄层层析点板， 使用展开剂展开， 选择在紫 外可见光分析仪下254nm或365nm有荧光的液体， 再合并8％硫酸乙醇香草醛显色剂显灰黄 绿的组分， 得到对称杂环化 合物。 5.根据权利要求4所述化合物的制备方法， 其特征在于： 步骤S2的固体培养基为燕麦培 养基， 将20 0g燕麦以及15 0mL双蒸水混合后获得。 6.一种权利要求1所述的化合物及药用载体在制备肿瘤耐药逆转剂 或肿瘤药物增敏剂 中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于： 耐药物或肿瘤药物为阿霉素。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于： 所述的肿瘤包括乳腺癌、 肺癌或者白血病。 9.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于： 所述肿瘤耐药逆转剂为转运泵抑制剂， 所 述转运泵抑制剂对耐药蛋白P ‑糖蛋白和多药耐药蛋白中一种或几种具有抑制作用。 10.权利要求1所述化合物及药用载体在制备抗肿瘤细胞药剂中的应用， 其特征在于： 所述的肿瘤 细胞包括耐阿霉素乳腺癌细胞、 耐阿霉素肺癌细胞或者耐阿霉素白血病。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115043790 A 3